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蛋白质和抗菌类药物在液/液界面吸附行为的全内反射光散射研究

奉萍

  当一束光以超过临界角θ_0的角度,从光密介质向光疏介质传播时,会在两相的界面上发生光的全内反射。在光疏介质一边有消逝波产生,其穿透深度仅波长数量级。利用光在液/液界面上的这一特性,结合共振光散射技术,建立了全内反射光散射分析方法。本文利用这一方法研究了协同配体与金属螯合物的界面反应,以及由静电引力产生的共同吸附作用,建立了灵敏度高、选择性较好的抗菌类药物和蛋白质分析方法,并对反应机理和反应条件进行了探讨。在溴化十六烷基三甲铵(CTMAB)存在下,依文思蓝(EB)与蛋白质作用在H_2O/CCl_4界面上产生明显的散射光增强信号,其最大散射波长位于360-370nm,反应宜在pH3.29-3.78的BR缓冲介质中进行,增强的全内反射光散射强度与0.07-1.2μg/ml范围内的蛋白质浓度成正比,其检测限为6.30ng/ml,方法具有较好的选择性,可以直接用于尿液中蛋白质的测定。在pH 6.37的条件下,钍(Ⅳ)与人血清白蛋白(HSA)形成配合物后,与十二烷基苯磺酸钠(SDBS)共吸附到H_2O/CCl_4界面上,产生增强的界面散射光信号,在355nm处增强的TIR-RLS与0.15-1.0μg/ml浓度范围内的HSA成正比,检测限(3σ)为14.4ng/ml。方法具有较好的选择性,可以不用分离γ-IgG,直接用于人血清中白蛋白的测定。在近中性条件下,氨苄青霉素(AmP)、苄青霉素(BP)、苯唑青霉素(OA)和羟氨苄青霉素(AmO),在阳离子表面活性剂CTMAB存在时,在CCl_4/H_2O界面上吸附聚集,使TIR-RLS增强,其最大散射波长位于368-372nm处。青霉素浓度在0.15-2.2×10~(-6)mol/l范围内与TIR-RLS增强的量成正比。方法具有较高的灵敏度,能测定纳克级的青霉素。通过对尿液浓度的测定,求得口服氨苄青霉素(AmP)的半衰期t1/2为1.05h,8小时药排泄为49.3%。在阴离子表面活性剂如十二烷基苯磺酸钠(SDBS)、十二烷基磺酸钠(SDS)和十二烷基硫酸钠(SLS)存在下,盐酸小檗碱在H_2O/CCl_4界面上的荧光增强,其激发波长为351nm,最大发射峰位于526nm。SDBS体系的灵敏度最高,线性范围为0.17—7.5×10~(-7)mol/l,检测限为1.67×10~(-9)mol/l。氨苄青霉素(AmP)、苄青霉素(BP)、苯唑青霉素(OA)和羟氨苄青霉素(AmO)与盐酸小檗碱在pH5.33介质中同时存在时,界面散射光显著增强,青霉素浓度分别在0.98—10.0×10~(-1)mol/l、0.87.10刀X10‘’m*l/l、1.1.12,0*10-’m*l/l和 1.2.互刀X10”’*OI/l范围内与 370删处增强的TIR报LS成线性,可以测定纳克级的青霉素,并且方法具有较好的选择性。青霉素与BBC 在界面上的组成比为1:1,其在界面的形成常数在2.76.3.69X‘之间。金霉素在pH7.548l 水溶液中与镐形成不饱和配合物,与溶于CCI。中的氧化三辛基磷(TOPO)在界面相互作用形成配合物,使界面散射光增强,其最大散射峰位于340皿。增强的*R-RLS与CTC浓度在0.98-20.ox 10”’mol/l范围内成正比,检测限为9.sxlo”’mol/l。用于人血清、人尿液和牛奶中金霉素分析方法,回收率在%斗J06.4%之间。相应地,在叫7.5{.7的水溶液中,E…HI)-CTC与TOPO在H。O/CCI。界面的反应,使界面荧光增强,其激发波长为397urn,最大发射峰位于 6]gum。金霉素浓度在0.17J.oxlo-’mol/l范围内与增强的 TIRF信号成正比,检测限为 2d“’mom。常见的金属离子的允许的共存量远大于水相荧光法。用于人血清、人尿液和牛奶中金霉素分析方法,回收率在99刀-105.2%之间。……