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带科主要绦虫45W和14ku/18ku基因变异的研究

贾万忠

  本研究论文,利用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR),从带绦虫六钩蚴或囊尾蚴RNA扩增45W和14ku/18ku基因,利用DNAstar软件对序列进行比较与分析,对这些基因变异规律进行了研究与分析,为带绦虫蚴病疫苗和免疫诊断制剂的研制与开发提供了重要依据,为寄生虫分子遗传与变异研究提供了模型。结果表明,共获得猪带绦虫45W转录本18个,其中A型转录本8个、相应的B型转录本3个、其它B型转录本6个,以及C型转录本1个。其中45W-4B基因与国外报道的基因在序列上差异极小,但首次发现猪带绦虫45W-4基因外显子Ⅳ中出现了单核苷酸多态性(SNP)。除4B外,其它基因外显子Ⅰ的变异只发生在第58位和70位上。核苷酸变异多为单碱基突变。对于A型转录本,241-271、364-394、448-473、602-613位为高变区,500、504、507、618、630和631位的碱基也多有变异。对于B型转录本而言,45W-4B型转录本与其它B型转录本差异以外显子Ⅰ最大,70个碱基中有24个出现变异,突变率高达34.3%。71-90、146-170、294-307位为高变区,197、201和204位为碱基突变高发位点。核苷酸的变异常导致氨基酸的变异,氨基酸变异程度明显高于核苷酸变异,45W基因编码蛋白的等电点变动幅度很大,在4.5-9.2之间。A、B型转录本富含亮氨酸、苏氨酸、丝氨酸,其次为甘氨酸和缬氨酸,约占总氨基酸的一半;使用少的氨基酸为半胱氨酸。低利用密码子有22个左右。在同型转录本中各成员对密码子利用基本相似,但个别成员对某些密码子的利用较特殊,如TSO45W-A2、A3对谷氨酸密码子的利用数目明显少于TSO45W-A4。4种碱基均可出现的在Ⅲ位的氨基酸常偏爱某一个密码子,例如脯氨酸偏爱CCC,甘氨酸少用GGG。A、B型转录本对密码子使用基本相似,但也存在一些差异,如B型转录本亮氨酸的TTA、苯丙氨酸的TTT为稀有密码子。在密码子不同位置上碱基分布存在明显差异。首次克隆到泡状带绦虫14ku cDNA、细粒棘球绦虫EG18 cDNA克隆各3个。泡状带绦虫和猪带绦虫之间具有共同的14ku蛋白;猪带绦虫和细粒棘球绦虫之间存在共同的18ku蛋白。14ku基因和18ku基因构成亲缘关系密切的基因家族。18ku和14ku基因家族内各成员间核苷酸序列存在不同程度的差异,这两种基因编码基因间核苷酸差异在13.6%-28.0%之间。14ku蛋白和18ku蛋白分别由85个和86个氨基酸组成,潜在的N-糖基化位点分别有0-1个和2-3个。……   
[关键词]:带绦虫;45W基因;14ku/18ku基因;变异
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:中国农业科学院2003年