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超嗜热菌Pyrococcus furiosus的培养及其α-淀粉酶基因的克隆与表达

林谦

  α-淀粉酶是最重要的一类工业酶,它们在淀粉加工、酿酒、乙醇生产、纺织和其他工业部门上都有广泛的应用。因为淀粉只在100℃或以上才能完全溶于水溶液,大多数应用于工业上的α-淀粉酶都要求能够在极高的温度(可达110℃)下使用。来源于强烈火球菌(Pyrococcus furiosus)的α-淀粉酶(PFA)具有应用于工业的潜力,因为其最佳反应温度达100℃,最佳pH为5.5~6.0,且其活力或热稳定性的维持不需要添加钙离子。Pyrococcus furiosus的小量培养采用排尽氧气后的Schott试剂瓶,同时不断通入氮气,温度保持在98℃。大量培养则采用10升的高压釜,在严格的厌氧条件下培养52小时。由8升的培养液得到的典型产量为2.4g(湿重)。根据GenBank公布的P.furiosus的α-淀粉酶基因amyA序列设计两条引物,以P.furiosus的基因组DNA为模板进行PCR。将PCR产物插入表达载体pSE380和pJL3,得到重组质粒pSE-amyA和pJL-amyA,转化到大肠杆菌DH5α,Top10,BL21(DE3)中。将重组菌株分别在29℃和37℃诱导表达,测得最高活力为1.5U/ml(在29℃诱导下)。SDS-PAGE亦显示PFA表达出了活力。在国内未见有该酶的研究报道。……   
[关键词]:超嗜热菌;强烈火球菌;α-淀粉酶;克隆;表达
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:广西大学2003年