手机知网 App
24小时专家级知识服务
打 开
手机知网|搜索

当归多糖的分离纯化与免疫调节作用及其机理研究

杨铁虹

  目的:多糖作为一类重要的生物反应调节剂,在抗肿瘤、抗衰老和免疫调节等方面具有良好的应用前景。研究证明,当归多糖具有抗辐射、抗肿瘤、促进造血等作用。然而,当归多糖的免疫调节作用及其机理尚有待阐明,本研究采用甘肃岷县当归[Angelica sinensis (Oliv.) Diels],分离纯化当归多糖,对此进行研究。方法:(1)新鲜当归,清洗、机械捣碎、乙醇回流萃取总挥发油成分;残渣经水煮、醇沉提取当归多糖;经透析、除蛋白、冷冻干燥得到白色粉末状当归总多糖(AP-0);再经常压凝胶过滤柱层析分离得到不同当归多糖组分。(2)采用改良苯酚-硫酸法测定总糖含量,间羟基联苯法测定糖醛酸含量,Serva Blue-G染料结合法测定蛋白质含量,HPLC法测定重均分子量,当归多糖组分经三氟乙酸完全水解后应用纸色谱分析单糖组成,溴化钾压片测定红外光谱;水溶液测定紫外光谱。(3)小鼠sc环磷酰胺或ig氢化可的松复制免疫抑制模型,ip AP-0,连续7天,碳粒廓清法测定单核巨噬细胞吞噬功能,进行外周血白细胞和股骨髓有核细胞计数,测定胸腺、脾脏重量计算脏体系数;用绵羊红细胞免疫小鼠,比色法测定血清溶血素IgG、IgM含量。(4)MTT法测定当归多糖组分AP-3对小鼠脾淋巴细胞、腹腔MΦ增殖反应以及混合淋巴细胞反应的影响;免疫磁珠法分离T、B淋巴细胞,测定AP-3对T、B细胞增殖的影响;AP-3与小鼠脾细胞共同体外培养72h,流式细胞术观察CD4~+细胞比例的变化。(5)体外培养小鼠脾细胞,加入不同浓度的AP-3,酶联免疫法测定上清液中IL-2、IFN-γ含量,定量RT-PCR法测定细胞内IL-2、IFN-γ mRNA的表达变化。第@罗臣大亏玛士功兔生学(抢支一结果:O)所得3个当归多糖组分AP八,AP毛和APS,水溶性强、表观性状好。()AP刀总糖含量67.9%,糖醛酸含量26.7%,蛋白质含量0.8%;APl总糖82.3%,糖醛酸18.l%,蛋白质0.5%,重均分子量*3-sl)X旷;AP-2总糖 73.7%,糖醛酸 38.l%,蛋白质 0.3%,重均分子量*-22)X旷;AP上总糖 68.3%,糖醛酸 37.5%,蛋白质 0.7%,重均分子量0-7)XIO\ 当归多糖各组分在单糖组成上没有明显差别,主要出o,Ara和 Glwt组成;红外光谱呈典型的多糖类吸收光谱,在 770血’有 D-葡萄糖毗哺环的吸收峰,在840cm-’有a-型的C打平伏键吸收峰,提示糖链构型是a-D叩哺型葡萄糖;*)在…10~100m沙g剂量范围内,当归多糖能对抗环磷酚胺或氢化可的松引起的小鼠脾萎缩,能增加正常小鼠脾脏重量,而对于正常及兔疫抑制小鼠胸腺无明显影响;能显著促进正常及免疫抑制小鼠碳粒廓清率;能够对抗环磷酚胺或氢化可的松引起的白细胞数和股骨髓有核细胞数的降低,对正常小鼠白细胞数和股骨髓有核细胞数无明显影响;不仅对正常小鼠血清溶血素IgG、lgM的生成有较强的抑制作用,还与环磷酚胺或氢化可的松有一定的协同作用。O)在30~300 lgitTll范围内,当归多糖主要组分 AP习能显著促进小鼠脾淋巴细胞。巨噬细胞、混合淋巴细胞和T淋巴细胞的增殖反应,而对B细胞增殖则有一定的抑制作用;显著增加培养的脾细胞中**矿细胞的比例;m当归多糖组分AP3呈时间、剂量依赖性显著增加培养脾脏淋巴细胞上清液中IL上的含量及细胞内mRNA的表达,而对IFN-Y,则呈先升高后降低。结论:*)当归多糖的主要组分AP上是均一性多糖,重均分子量低,范围窄,具有潜在药用价值。O)当归总多糖能增强正常小鼠非特异性免疫功能,能对抗环磷酚胺和氢化可的松引起的免疫抑制,而对体液免疫功能则有较强的抑制作用;O)当归多糖组分AP上能增强巨噬细胞和T淋巴细胞的功能,而对B细胞的增殖具有抑制作用;表明当归多糖促进小鼠非特异性免疫和细胞免疫功能是直接激活巨噬细胞、T淋巴细胞,而4筹@罗庄丈学埔士村惠生官幢伦支一其抑制体液免疫则可能与直接抑制B淋巴细胞有关。O当归多糖升高h七和IFN1可能与其调节机体免疫功能密切相关。……   
[关键词]:当归;多糖;免疫调节;非特异性免疫;体液免疫
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:中国人民解放军第四军医大学2003年