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川芎中活性细胞膜受体作用成分的色谱法研究

张延妮

  经典的中药活性成分研究方法是通过提取中药中单一成分,再进行药理实验确定其有效成分,这种方法步骤烦琐,劳动强度高,并且成功的概率低。随着现代分子生物学的发展,出现了将色谱分离与分子生物医学二者的新成果结合起来的新方法。将活性细胞膜固定在色谱填料上,能够模仿药物在体内与受体的作用过程,对中药活性成分筛选、分离进行一体化分析,有着广阔美好的应用前景。本文包括综述和研究报告两部分。第一部分:中药及其复方有效成分筛选的研究进展综述一、色谱及其联用技术在中药及其复方有效成分筛选中的应用。阐述了经典的药物提取方法,以及色谱-质谱联用、毛细管电色谱以及超临界流体色谱等技术在药物筛选中的应用。二、中药及其复方有效成分筛选的作用机理研究。介绍了以中医药理论为指导的中药单方、复方以及复方不同配伍的药理作用研究。三、生物技术在中药及其复方有效成分筛选中的应用。总结了分子细胞生物学在中药及其复方有效成分筛选的研究中的应用。四、中药及其复方有效成分筛选模型的研究。介绍了四种药物筛选的模型。第二部分:研究报告一、川芎不同提取液的制备。介绍了药材中提取天然活性成分的方法,应用溶剂提取法制备了川芎的水提液、醇提液以及醚提液。二、心肌细胞膜的制备。制备了心肌细胞膜并对其蛋白质的含量进行了测定。三、硅胶载体细胞膜固定相的制备。制备了硅胶载体细胞膜(cell membrane stationary phase,简称CMSP)并通过使用X光电子表面能谱和电镜技术对其表面特性进行了分析研究,同时对CMSP酶活性随时间变化的规律也进行了研究。四、硅胶载体细胞膜色谱柱的制备及色谱保留特性。制备了CMSP色谱柱并对所装色谱柱的重现性进行了检验;分别以硅胶色谱柱和CMSP色谱柱对水提液的保留特性进行了比较,验证了CMSP的分离功能并进一步验正了对CMSP表面特性进行分析的结果;对同一种物质在CMSP色谱柱上的保留时间随时间变化的规律进行了研究,结果发现,其变化的规律与CMSP酶活性随时间变化的规律相似,由此C肥P酶活性和受体活性随时间变化的规律基本一致。五、色谱法研究中药1!【穹中活性细胞膜受体作用成分。1.受体具有结合专一性,作用于同一受体的物质的保留时间相似,根据这样的原理,对心肌细胞上已知受体的部分激动剂和桔抗剂以及川草的不同极性溶剂的提取液的保留时间进行了测定和对比。实验结果显示,水提液中可能有与a-受体作用的成分,醇提液中可能有与p;-受体作用的成分,乙醚提取液中可能至少有5种成分能够与心肌上的己知受体作用,但由于所购药品的限制,未确定出是与哪种受体作用。2.受体具有可饱和性和结合可逆性,如果当一种受体与其相应的某种激动剂或桔抗剂己经结合至饱和,而此时再加入与此受体相应的另一种激动剂或拈抗剂,则由于竞争作用使得后来加入的激动剂或拾抗剂与受体的结合将会减弱。将口受体的一种桔抗剂加入磷酸缓冲液流动相,发现水提液样品中两峰的保留时间均比采用不加桔抗剂而只用磷酸缓冲液作流动相时的保留时问短,悦明水提液中有某种或某些成分与口受体拈抗剂竞争受体,从而使那些成分’uQ受体的结合受到削弱,这进一少证明了水提液*!1有成分作川丁Q-受休;将p-受体激动剂加入磷酸缓冲液流动川,水捉池个的成分的保冒川什。J’JJI川不加激动剂而只用磷酸缓冲液作流动川时的保秋时问州比尤较人差w,Z;I-儿水提液中不含有能与p;-受体结合的成分。3.对川穹中己知的几种成分在硅胶载体细胞膜上的保留时问进行了分析,纶垠显示,川考啼的保留时间与水提液中某种成分的保留时问接近,并h.与口受体拈抗剂的保留时间接近,山此,川学啼与水提液中某种成分可能部M厂仆用于。受体的同一类物质;香兰素的保留时问与醇提液中某种成分的保趴时问接近,并且与6;受体抬抗剂的保留时间接近,山此,香兰素与醇提液小义种成分可能都属于作用于p;受体的同一类物质;大黄酚与醚提液小某种成分保留时间接近,可能属于同一类物质,但未发现他们是与何种受体作JU门sllJ魏酸在CMSP上无保留,说明阿魏酸不与心肌细胞膜上的仔何受体作川。)4苇中各种活性成分的进一步分离、纯化及药理实验还在进行之小。……   
[关键词]:硅胶载体细胞膜固定相;高效液相色谱;受体;川芎;有效成分
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:陕西师范大学2003年