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人野生型p53肿瘤抑制基因导入烟草的遗传转化研究

康杰芳

  人类癌症中最常见的基因改变是p53基因突变,它是癌基因研究中重要的肿瘤抑制基因之一,野生型p53基因与细胞周期的生长调节、细胞转化的调节、DNA复制以及诱导细胞程序性死亡(apoptosis)有着密切关系。将人野生型p53基因或蛋白引入肿瘤细胞是目前非常有前景的肿瘤基因治疗方法之一。本实验试图将人野生型p53肿瘤抑制基因引入烟草植株,使转基因烟草成为该基因表达蛋白的生物反应器,改变传统的药物生产方式,降低生产成本,开辟一条生产药用蛋白的新途径。本研究将人野生型p53基因编码区与在植物中特异表达的启动子和终止子相连,然后将连接片断插入载体pCAMBIA2301的HindⅢ和EcoR Ⅰ酶切位点之间,构建成一个能转化植物并在其中表达人野生型p53基因的带有NPTⅡ和GUS基因的重组体质粒pCAMBIA2301/p53,以烟草无菌苗叶片为外植体,利用叶盘法,通过根癌农杆菌EHA105介导进行转化,开展p53基因转化烟草的研究。其主要结果如下:1.建立了以烟草无菌苗叶盘为外植体的遗传转化体系,利用农杆菌介导将p53基因导入烟草,获得了抗卡那霉素表型和GUS基因表达的转基因再生植株。2.研究了头孢曲松钠、头孢哌酮钠、头孢西林钠、头孢唑林钠、头孢拉定五种头孢霉素类抗生素对农杆菌EHA105的抑制作用和对烟草愈伤组织的诱导及不定芽形成的影响,在实验条件下头孢曲松钠的抑菌效果最好,适宜浓度为200mg/L。3.经组织化学法、Southern杂交检测,表明人野生型p53基因已整合到转基因烟草植株的基因组中,获得了含人野生型p53基因的烟草转化植株。……   
[关键词]:人野生型p53基因;烟草;农杆菌;基因转化;抗生素
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:陕西师范大学2003年