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超强毒鸡传染性法氏囊病病毒克隆化毒株选育及其对免疫器官的影响

赵静

  鸡传染性法氏囊病(IBD)是由传染性法氏囊病病毒(IBDV)引起的免疫抑制性疾病,疫苗接种是预防本病的主要手段。20世纪80年代中后期由于国内外已先后出现了超强毒株和变异株IBDV,IBD免疫失败时有发生。为研制高效的疫苗,国内外学者先后成功地进行了超强毒株和变异毒株弱毒的培育,Rosenberger等首次将变异株E经CEF传代获得致弱,Kibenge等将变异株A经Vero细胞传代获得弱毒株,Tsai等分别将变异株IN和E适应在BGM-70上,经 30代和 40代,失去了对鸡的致病性。本试验以超强毒传染性法氏囊病病毒的国内分离株 GX8/99株为研究对象,将该毒株先在鸡胚传10代,又经CEF盲传22代,开始适应鸡胚成纤维细胞(CEF),并引起细胞病变,表现为细胞聚缩、细胞拉成纤丝状,死细胞粘附其上,最后变圆、脱落。到25代经2次无限稀释法克隆,获得4株克隆化病毒株。对超强毒IBDV GX8/99株的囊毒、鸡胚传代毒及其克隆化病毒分别采用AGP、免疫胶体金试纸膜及荧光抗体检测证明了IBDV的存在,这三种检测方法以免疫胶体金试纸膜法最为简单、方便、快速,并且灵敏度也非常高(可达到10-4~10-5)。对超强毒IBDV GX8/99株原始毒囊毒及其克隆化细胞毒进行ELD50测定,并对克隆化细胞毒进行TCID50测定。结果表明原代毒在鸡胚上的滴度最高,4株克隆毒的滴度稍低于原代毒。4株克隆化细胞毒的ELD50、TCID50总体上差别不明显,但是对鸡胚及CEF的亲和力表现的完全不同。克隆1在鸡胚的滴度最低但是在CEF的滴度很高,克隆2在鸡胚的滴度最高但是在CEF的滴度最低,克隆3、克隆4在鸡胚及CEF的滴度变化比较一致。表明4个克隆化毒株对鸡胚及鸡胚成纤维细胞的亲和力明显不同。说明它们是不同的克隆化细胞毒。将超强毒IBDV GX8/99株囊毒及其克隆化细胞毒,分别接种4周龄SPF鸡4天后的法氏囊指数均比健康对照同批鸡低1.72~3.06倍,胸腺指数均比健康对照同批鸡低,而且原代毒萎缩严重,比对照组低4.54倍,其余4个克隆化毒萎缩稍轻,比对照组低1.26~1.79倍;脾脏指数均比健康对照同批鸡高,比对照组高1.14~1.64倍,说明原代毒及克隆化细胞毒均可以引起法氏囊及胸腺萎缩、脾脏肿胀。初步揭示了超强毒IBDV GX8/99株免疫抑制的机理。本研究通过超强毒株GX8/99株在鸡胚传代、细胞适应,又经克隆化获得了4株克隆化细胞毒。接种SPF鸡致病试验表明4株克隆化细胞毒的致死率均小于6.7%,其中有两株致死率为0(克隆1和克隆4)。因此可以预见,通过该传代致弱途径,有希望获得对超强毒IBDV有预防作用的弱毒疫苗株,为有效预防超强毒IBDV的感染奠定基础。……   
[关键词]:传染性法氏囊病病毒;超强毒株;细胞克隆化毒;选育;免疫器官;影响
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:山东农业大学2003年