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中华眼镜蛇毒组分C与传统化疗药物体外抑制人胶质瘤株作用的对比研究

梁建峰

  目的:近年来,人们运用蛇毒治疗肿瘤进行了较多的研究,但利用蛇毒治疗脑肿瘤,在国内外尚未见报道。本研究使用蛇毒进行脑肿瘤的体外敏感试验意义在于为胶质瘤的药物治疗提供多种方法。本研究采用后者使用的中华眼镜蛇毒组分C(Fraction C from Naja Naja Actra Venom,FC)是属于提纯的蛇毒成分。组分C是广东产眼镜蛇毒先后经DEAE SephadexA-50阴离子交换柱层析,CM SephadexC-25阳离子交换柱层析,及SephadexG-75分子筛柱层析分离纯化出来的活性组分,急性毒性实验显示组分C毒性LD50为(2.88±0.41)mg/kg远较眼镜蛇毒LD50为(0.69±0.12)mg/kg低。本研究通过使用中华眼镜蛇毒组分C体外对人胶质瘤细胞株U251的细胞毒作用和机理,并与传统脑肿瘤化疗药进行比较,来阐明相对于传统的化疗药如ACNU等而言,FC可能是有效的、选择性较高的抗胶质瘤新药。方法:以10%小牛血清的RPMI 1640培养液于37℃5%CO_2培养箱中湿化孵育U251;然后接种于96孔培养板中,加入不同浓度的FC、ADM和ACNU。采用细胞毒试验(MTT法),通过细胞生长抑制率评价FC、ACNU和ADM对上述细胞的细胞毒作用。无菌条件下培养胶质细胞细胞,接种于96孔培养板中,加入不同浓度的FC,通过MTT法了解FC的细胞毒性。另外,采用联合使用FC与ACNU,来评价细胞毒作用。结果:在加药24小时后FC对U251有抑制作用,并呈明显的量效关系。其中以FC对胶质瘤细胞的抑制作用突出,FC在浓度为2μg/ml对U251的抑制率已达41.5%,IC_(50)为2.95μg/ml。而ADM与ACNU远未达到此抑制率。48小时FC对U251的抑制作用呈良好的时效关系。FC对U251的IC_(50)为2.21μg/ml、与24小时对比两者之间对U251的抑制率有明显差异。然而,FC对正常胶质细胞的抑制作用呈抛物线关系。当FC浓度超过2μg/ml时正常胶质细胞的抑制率明显上升,而且48小时与24小时对比有明显的时效关系。FC对正常胶质细胞的IC_(50)24硕士学位论文中文摘要J时、48 ’J’时分别为 8.60 n g/ml和 6.61 g/ml。另外,本研究还提示FCZ n g砌 n g/ml及单用其中一种药对人肿瘤细胞具有更好的抑制作用(P<0.05)。结论:近年来,人们运用蛇毒治疗肿瘤进行了较多的研究,但利用蛇毒治疗脑肿瘤,在国内外尚未见报道。本实验在胶质瘤的体外敏感试验中发现:二.人胶质瘤细胞对FC的细胞毒性作用是敏感的。2.胶质瘤细胞的抑制率与FC有明显的量效关系 FC在浓度为 2 n g/ml时,即对传代细胞株产生明显的抑制作用,剂量越大,抑制作用越明显,本实验进行了24h及48h的兀。(半量抑制浓度)分别为 2.95和 2.21 m加。结果显示胶质瘤细胞的抑制率与 FC有明显的量效1关系;3.U251细胞系对各药物的敏感性比较来看,在24小时FC对胶质瘤细胞的抑制作用优于ADM和ACNU。FC、AI)M和ACNU对细胞的抑制作用比较中,FC对肿瘤细胞的抑制作用在24小时已经很明显,而ADM和ACNU对细胞的抑制作用主要出现在48h,在24小时FC对U251细胞系的敏感性高于ADM和ACNU。4.FC能具有较高选择性。它能选择性作用于胶质瘤细胞,在有效浓度下对正常组织保持低毒性。例如24h FCQ P g/ml)对U251的抑制率为ICto分别为41.5民但同浓度时”C对正常胶质细胞的生长抑制率仅为12.9见由此可见FC对正常细胞的敏感性远低于肿瘤细胞。也是初步具备低毒性和安全性的抗癌药。5.FC与ACNU可产生协同互补作用,也提示了两劳作用机制的差异。FC与ACNU两者联合使用可大幅度降低化疗药物浓度,提高胶质瘤细胞对化疗药物敏感性,加强对胶质瘤绸胞增殖的抑制作用。由此可见,相对于传统的化疗药如ACNU等而言,FC是更为敏感的、选择性高的抗胶质瘤新药。但其作用有待进一步体内及临床实验证明。……   
[关键词]:眼镜蛇毒;脑肿瘤;组份C;细胞毒;化学疗法
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:中南大学2003年