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绵马贯众有效成分的研究

高增平

  本论文分为两部分:第一部分 对中药贯众的品种、化学成分、药理活性研究现状进行了综述;对鳞毛蕨属植物的化学成分及药理活性研究进展进行了综述;共引用文献115篇。第二部分 在商品贯众品种调查研究的基础上,选择被我国2000年版药典收载且目前临床应用较广泛的绵马贯众作为研究对象,详细论述了绵马贯众的有效部位筛选及其化学成分的提取、分离、结构鉴定;单体化合物的活性测定;有效部位中有效成分的定量分析;有效部位的HPLC指纹图谱研究,使化学成分研究紧密围绕药理活性进行。对全国范围内及北京市所有区县销售的商品贯众(来自22个省市共40份样品)进行了品种鉴定研究,结果表明目前临床所用贯众主要有7个品种,分属于4个科5个属,它们分别为绵马贯众即鳞毛蕨科鳞毛蕨属植物粗茎鳞毛蕨(Dryopteris crassirhizoma)及其同属植物辽东鳞毛蕨(D.peninsulae)、蹄盖蕨科峨眉蕨属植物峨眉蕨(Lunathyrium acrostichoides)、乌毛蕨科乌毛蕨属植物乌毛蕨(Blechnumorientale)、乌毛蕨科狗脊蕨属植物狗脊蕨(Woodwardia japonica)及其同属植物单芽狗脊蕨(W.unigemmata)、球子蕨科荚果蕨属植物荚果蕨(Malteuccia struthiopteris)。首次发现绵马贯众具有抗疟活性,并将绵马贯众的甲醇总提取物按极性不同分为A、B、C、D 四个部位,分别进行了抗疟和抗乙肝病毒活性筛选,结果表明:抗疟有效部位为A和B;抗乙肝病毒有效部位为A和C。首次对绵马贯众进行了系统的化学成分研究,从A、B、C、D 四个部位中分离得到28个单体和一个油状物。利用波谱技术(包括UV, IR, EI-MS, FAB-MS, HR-MS, 1H-NMR, 13C-NMR, HMQC, HMBC, DEPT, HH-COSY)和化学方法,鉴定了20个化合物,其中2个为新化合物,结构分别确定为[2R,3R]-2,3-顺-3,5,7,3 ,5 -五羟基黄烷-8-C-α-D-吡喃葡萄糖苷和三环黄绵马酸ABB;14个为首次从该植物中分离得到的单体,它们分别为二十六烷酸、橙花叔醇、二十五烷醇、3-羟基-二十七烷醇、黄绵马酸AB、蔗糖、β-D-吡喃果糖、1-(乙炔基乙酸)-3-(3-己炔酸)-甘油酯、1,3-二(3-己炔酸)-甘油酯、1-(3-己炔酸)-甘油酯、α-D-呋喃果糖、β-D-呋喃果糖、咖啡酸、[2R,3R]-2,3-顺-3,5,7,3 ,5 -五羟基黄烷;其余4个已知化合物为:绵马酸ABA、东北贯众素ABBA、白绵马素AA、hydroxyhopane;经硅胶柱层析得到的油状物利用GC-MS技术首次鉴定了12个化合物,它们分别为:丁基环己烷、顺式十氢萘、1-甲基乙基-环己烷、9-(1-甲基亚乙基)-二环[6.1.0]壬烷、环己烷基环己烷、(-)-3,7,7-三甲基-11-亚甲基-螺[5.5]十一-2-烯、[1S-(1α,3aβ,4α,8aβ)]-十氢-4,8,8-三甲基-9-亚甲基-9-1,4-亚甲基奥、3,7,11-三甲基-2,6,10-三烯十二烷-1-醇、石竹烯、2,3,4,4a,5,6-六氢-1,4a-二甲基-7-(1-甲基乙基)-萘、[1aR-(1aα,7α,7a,7b)]- 1a,2,3,5,6,7,7a,7b-八氢-1,1,7,7a-四甲基-1H-环丙烷[a]萘、α-姜黄烯;经LC/MS/MS法测定抗疟有效部位,又发现了1个新化合物,命名为东北贯众素ABAA,是四环间苯三酚衍生物,同时又首次鉴定了另一个四环间苯三酚衍生物——东北贯众素ABPA。总之通过对绵马贯众进行系统的化学成分研究,发现了3个新成分(其中分离得到2个,LC/MS/MS鉴定1个)、首次分离得到14个已知成分、首次鉴定13个已知成分。首次对分离得到的单体化合物东北贯众素ABBA进行了体内抗疟活性测定,结果表明:东北贯众素ABBA具有很好的抗疟活性,抗疟活性比有效部位强3~4倍(部位A的半数有效剂量为150.57mg/kg,而东北贯众素ABBA的半数有效剂量为38.47mg/kg),因此推测东北贯众素ABBA为有效部位中主要的抗疟有效成分。同时首次对7个单体化合物进行了抗乙肝病毒体外活性测定,结果表明其中6个化合物均对HBsAg有抑制作用,1个化合物对HBsAg和HBeAg均有抑制作用。首次对自制的6批抗疟有效部位进行了定量分析,结果表明:抗疟有效部位中含有5个成分,其中东北贯众素ABBA为主要成分,含量高达73.15%至83.85%。首次建立了抗疟有效部位的HPLC指纹图谱测定方法及技术参数,并通过与对照品对照和LC/MS/MS法测定,对抗疟有效部位指纹图谱中各共有指纹峰进行了归属。精密度实验考查结果表明:各共有指纹峰相对保留时间的RSD在1.05%至2.70%之间,峰面积比值的RSD为1.56%;稳定性实验考查结果表明:供试品溶液应在3h内测定;重现性实验考查结果表明:各共有指纹峰相对保留时间的RSD在0.54%至3.26%之间,峰面积比值的RSD为2.92%。6批样品非共有峰占总峰面积的百分比均未超过5%。经过上述对绵马贯众化学成分研究,共鉴定35个化合物(其中12个为GC-MS鉴定、3个为LC/MS/MS鉴定),其中3个为新化合物(2个为分离得到的新单体化合物,1个为LC/MS/MS鉴定的新化合物)(已申请专利);14个为首次从该植物中分离得到;13个为首次从该植物中鉴定;其余5个为曾经从该植物中得到和鉴定的已知化合物。首次发现了绵马贯众的新活性-抗疟作用(已获得发明专利证书),并制备出抗疟有效成分和有效部位,而且对抗疟有效部位建立了以有效成分为指标的定量分析方法和指纹图谱检测方法,为将其开发为成分明确、……   
[关键词]:绵马贯众;有效成分;抗疟;抗乙肝病毒;高效液相色谱;指纹图谱
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:北京中医药大学2003年