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解毒通络保肾胶囊对糖尿病大鼠肾脏保护作用机制的研究

赵贤俊

  糖尿病肾病(DN)是糖尿病(DM)主要的慢性并发症之一,是导致慢性肾功能不全的常见原因,在终末期肾病病人中约三分之一是由DN引起的。本论文从文献综述、实验研究两方面对解毒通络保肾胶囊防治DN的机理进行了较系统的研究。1 文献综述1.1 糖尿病肾病的中医药研究概况从DN的中医溯源、中医病名的探讨、病因病机、辨证论治、分期辨证论治、专法专方治疗和单味中药及提取物的治疗等方面的研究进展情况进行了综述,并对当前在诊断及疗效评定标准、辨证分型和科研等方面存在的问题进行了述评和展望。1.2 糖尿病肾病的中医药实验研究近况依据DN的发病机理,即肾组织糖代谢紊乱、脂代谢紊乱、血管活性物质、生长因子与化学趋化因子、反应氧中间产物及实验动物模型等几方面,对近年来中医中药防治DN机理的实验研究成果、研究动态进行了综述,并进行了评述和展望。1.3 肾素-血管紧张素系统、转化生长因子-β及结缔组织生长因子与糖尿病肾病的发病机制就近年来国内外在DN发病机制中,肾素-血管紧张素系统(RAS)、转化生长因子-β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF)作用机制的最新研究成果及研究动态进行了综述。2 实验研究2.1 解毒通络保肾胶囊对实验性糖尿病大鼠肾脏功能的影响采用链脲佐菌素(STZ)诱导大鼠实验性DM模型,设正常对照组、DM对照组、阳性对照组(DM+苯那普利)和实验组(DM+解毒通络保肾胶囊),实验第12周末,观察各项指标。结果表明,解毒通络保肾胶囊明显改善DM大鼠的一般状态,具有一定的降低血糖和血清胆固醇作用,与DM对照组比较具有显著的统计学意义(P<0.01,P<0.05);能够抑制DM大鼠早期肾脏肥大及肾小球高滤过;降低DM大鼠升高的血清尿素氮、肌酐和内生肌酐清除率,与DM对照组比较具有显著性差异(P<0.01,P<0.05);显著降低实验大鼠尿白蛋白排泄率(UAER)和24h尿蛋白排泄量,与DM对照组比较差异显著(P<0.05,P<0.01)。提示解毒通络保肾胶囊对实验性DM大鼠具有良好的调节糖脂代谢、抑制肾小球高滤过和肾脏肥大、减少尿蛋白排出、保护肾功能的作用。2.2 解毒通络保肾胶囊对实验性糖尿病大鼠肾脏组织形态学变化的影响本实验通过光镜、电镜观察各组实验性DM大鼠12周末肾组织形态学变化,并利用免疫组化方法观察解毒通络保肾胶囊对DM大鼠肾小球细胞外基质(ECM)的主要成分Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)和纤维连接蛋白(FN)沉积的影响。结果表明:DM对照组光镜下可见肾小球系膜区弥漫性增宽,PAS阳性的均质蛋白性物质明显增多,肾小球ECM增多,系膜细胞轻度增生,肾小球基底膜(GBM)增厚等表现,透射电镜观察结果为肾小球基底膜呈阶段性增厚,有的模糊不清,上皮足突广泛融合或部分融合,滤过膜间隙增大,系膜区扩大,系膜细胞增多。经解毒通络保肾胶囊治疗12周后的实验组上述病理改变比DM对照组比较显著减轻;免疫组化结果表明,DM对照组Col Ⅳ与FN免疫染色从强度到面积都明显增加,可达正常对照组的5倍以上,且其染色浓重的区域通常与细胞增生区域有关。解毒通络保肾胶囊治疗12周后的实验组Col Ⅳ及FN在肾小球内表达从染色到面积均明显减轻。提示解毒通络保肾胶囊能够明显改善实验性DM大鼠肾组织的病理变化,对DM肾脏具有保护作用,并能抑制DM大鼠肾小球系膜细胞ECM的合成,减轻其积聚,从而改善DM肾小球硬化。2.3 解毒通络保肾胶囊对实验性糖尿病大鼠肾脏肾素-血管紧张素系统的影响的研究用放射免疫法和生物化学法检测各组实验动物肾脏标本中的肾组织肾素活性(TRA)、血管紧张素转换酶(ACE)活性和血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)含量。结果表明:DM对照组肾组织AngⅡ含量明显增加,肾组织ACE活性明显增强,与正常对照组比较有显著的差异(P<0.01),但TRA增强不明显,与正常对照组比较无统计学意义(P>0.05);血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)苯那普利治疗12周后的阳性对照组肾组织AngⅡ含量显著下降,ACE活性明显减弱,与DM对照组比较差异显著(P<0.01),同时TRA显著增强,与正常对照组和DM对照组比较均有统计学意义(P<0.01);实验组DM大鼠肾组织中AngⅡ含量、ACE活性较DM对照组明显下降(P<0.01),但TRA升高不显著,与阳性对照组比较差异显著(P<0.01),与正常对照组和DM对照组比较均无统计学意义(P>0.05)。提示解毒通络保肾胶囊具有一定的抑制DM大鼠TRA和肾组织中ACE活性,从而减少肾组织中AngⅡ含量的作用。2.4 解毒通络保肾胶囊对糖尿病大鼠肾脏转化生长因子-β1表达的影响采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,检测各组实验大鼠肾脏皮质中TGF-β1基因的表达含量,观察解毒通络保肾胶囊对实验性DM大鼠肾脏TGF-β1 mRNA表达的影响,目的是探讨该中药复方制剂防治DN的分子机制。结果表明:DM对照组12周末大鼠肾皮质TGF-β1 mRNA水平明显高于正常对照组(P<0.01),达2.5倍;阳性对照组和实验组TGF-β1 mRNA水平较DM对照组均明显下降(P<0.05),两组之间比较差异不显著(P>0.05)。提示解毒通络保肾胶囊具有较强的抑制DM大鼠肾脏皮质TGF-β1 mRNA过度表达,其防治DN的作用可能部分通过抑制TGF-β1 mRNA过……   
[关键词]:糖尿病肾病;解毒通络保肾胶囊;肾素-血管紧张素系统;转化生长因子-β1;结缔组织生长因子;实验研究
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:北京中医药大学2003年