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菌源性胞外弹性蛋白酶的提取及性质研究

刘鹭

  研究利用一株铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa SWU-M)产生胞外弹性蛋白酶(Elastase),在液体培养基发酵产弹性蛋白酶活力可达15单位每毫升。发酵液经离心去菌体后用于提取酶。1.分别用盐析与有机溶剂沉淀提取酶。pH4.91、4℃、盐析度为30%-50%的盐析物使酶的比活为47u/mg.pro,方便且酶的回收率较高。pH4.91,-20℃,离子强度为0.2mol/L,1倍-3倍体积的丙酮沉淀物使酶的比活为37u/mg.pro,方法复杂,对致冷要求较高(-20℃)且酶的回收率低,易失活。因此直接采用盐析后产物进行4℃透析过夜及4℃、0.5个大气压的超滤,经透析及超滤后,酶活为75u/mL,酶比活为100u/mg.pro。2.在不同缓冲液,弹性蛋白酶的最适pH值不同,在硼砂-硼酸缓冲体系中为7.8,在Tris缓冲体系中为8.48;作用最适温度为50℃.;在pH7-12保存,酶的活性较高并趋于稳定;温度低于40℃酶活较稳定。3.重金属对酶存在不同程度的抑制作用,钙离子对酶活有激活作用;EDTA的存在可不同程度抑制酶活。4.一定浓度的甘油、巯基乙醇对弹性蛋白酶的活性和热稳定性都有一定的提高;微量的硫酸铵对酶的活性有激活作用。5.可被阴离子、非离子表面活性剂激活,具体作用有所差别。6.酶的最大反应速度为0.09512u/ml,米氏常数为0.741%;与其它酶相比,弹性蛋白酶对弹性蛋白有强烈的亲和吸附作用,从而弹性蛋白酶有优先水解弹性蛋白的能力。7.此酶能降解弹性蛋白、明胶、酪蛋白、大豆分离蛋白、牛血清白蛋白、卵白蛋白,水解产物以脯氨酸羟脯氨酸形式存在。并且对于弹性蛋白含量丰富的肉类:牛胃、猪皮及纯的弹性蛋白样品,有较强的水解力。对于一些较韧的肉类如牛肉、猪肉,弹性蛋白酶的水解力可达至59.9%,对于较嫩的肉类(鱼肉)水解力仅为22.8%。8.嫩化肉类实验表明,经弹性蛋白酶处理的样品嫩化效果优于目前普遍用的肉类嫩化剂木瓜蛋白酶的效果,是一种比较理想的肉类嫩化剂。……   
[关键词]:铜绿假单胞菌;弹性蛋白酶;盐析;嫩化
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:西南农业大学2003年