手机知网 App
24小时专家级知识服务
打 开
手机知网|搜索

蚕蛹氨基酸大输液原粉制备方法的研究

陆洪省

  本研究是采用酸法(盐酸)水解脱脂蚕蛹,通过离子交换吸附方法对蚕蛹蛋白水解液进行氨基酸纯化,然后用活性炭和硅藻土吸附方法去除氨基酸溶液中的热原物质,浓缩、冷冻干燥至氨基酸原粉,并通过细菌内毒素试验和家兔热原实验对上述原粉进行热原检测,结果表明热原检测符合要求,最终证明了由蚕蛹蛋白制备氨基酸大输液原粉是完全可行的。此外,利用日立氨基酸自动分析仪(835-50)、瑞士全自动索氏浸提仪(Foss2050)、日本岛津原子吸收分光光谱仪(AA-6501)、瑞士全自动凯氏定氮仪(Foss2300)测定原粉的化学成分。实验研究共分四部分:一、蚕蛹氨基酸原粉的制备用6mol/L的盐酸,按1:4(脱脂蚕蛹质量:盐酸体积)的配比,105℃~110℃条件下,水解脱脂蚕蛹24h。然后经过脱酸、上柱、阳离子交换树脂吸附纯化、洗脱、浓缩、冷冻干燥等过程得到氨基酸原粉。实验结果表明,用盐酸水解24h,可以将蚕蛹蛋白彻底水解,能基本保持所得氨基酸的生物活性,并且,所得氨基酸原粉中7种人体必需氨基酸(色氨酸在水解时被酸破坏)的含量较高,氨基酸得率为40%。二、蚕蛹复合氨基酸原粉中热原的去除本试验应用活性炭吸附方法,去除氨基酸原粉中的热原。在脱氨后的氨基酸溶液中,分别加入蚕蛹质量25%的针用活性炭和硅藻土,边加热边搅拌,吸附、过滤,浓缩、干燥得氨基酸原粉,最后检测原粉热原。最终结果表明:用蚕蛹质量25%的活性炭吸附,所得氨基酸原粉的热原检查合格。三、蚕蛹复合氨基酸的热原检测本实验用鲎试验法和动物实验(家兔法)两种方法检测蚕蛹复合氨基酸中的热原。1、鲎试验法检测热原鲎试验(LAL)是通过观察鲎试剂与微量热原物质发生反应,是否生成凝胶来判断热原合格与否。按《中国药典》规定的方法,对鲎试剂进行灵敏度标定和干扰实验。干扰实验是将活性炭和硅藻土吸附后的滤液浓缩,干燥成粉,然后将此氨基酸粉配制成浓度为10%的溶液,并对溶液做4倍、8倍、16倍、32倍稀释进行干扰实验。结果表明:用蚕蛹质量25%的活性炭吸附后的4倍、8倍、16倍稀释液均出现干扰作用,32倍稀释液没有干扰作用。而在相同条件下,硅藻土吸附后氨基酸含量为10%的4倍、8倍、16倍和 32倍稀释液均表现为干扰。热原检测按《中国药典》规定的细菌内毒素检查方法进行,对上述活性炭吸附后’的32倍氨基酸稀释溶液进行热原检测。实验结果表明:32倍的此氨基酸稀释液呈阳性卜)反应,即热原的鲨试验检测为不合格。原则上,鲨试验检测热原为阴性卜)者,即判断为热原合格。鲨试验热原检测为阳性卜)者,再用家兔法检测,热原检测最终以家兔法为准,即鲨试验法检查为阳性卜),而家兔法检测没有出现热原反应,则热原判定为合格,相反,如果家兔法检测时出现热原反应,则热原判定为不合格。2、家兔法检测热原家兔法检测热原是通过向家兔静脉中注射一定剂量氨基酸溶液,然后在规定时间内测定家兔体温的变化,通过体温的变化值来确定热原是否合格。根据《中国药典)}1995年二部附录76规定的方法,用家兔法检测热原。结果表明:用蚕蛹质量25%的活性炭吸附后,浓度分别为10%和2%的氨基酸溶液热原检查均合格。四、蚕蛹氨基酸大输液原粉的成分测定氨基酸原粉成分的测定结果:氨基酸溶液经用蚕蛹质量25%的活性炭吸附后,以此制得的氨基酸原粉中总氮量、灰分、重金属含量(以汞计)、水分分别为12.8%、0.47%、l*smgilig和5.31%,粗脂肪没有检出。本研究结果表明,通过水解蚕蛹蛋白制备氨基酸大输液原粉方法基本可行,为进一步研究开发该产品提供了一定的依据和技术参数。……   
[关键词]:蚕蛹;水解;氨基酸;热原;大输液;鲎试验
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:浙江大学2002年