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双黄连抗柯萨奇B_3型病毒感染新生大鼠原代心肌细胞效应的研究

刘培辉

  目的:观察双黄连抗柯萨奇B_3病毒感染新生大鼠原代心肌细胞的效应,并初步探讨其机制。方法:选用出生1-3天的Sprague-Dawley大鼠,取其心室肌组织,制备新生大鼠原代心肌细胞,在96孔细胞培养板培养72小时,长成单层细胞后,实验分为四组进行,(1)双黄连对新生大鼠原代心肌细胞毒性作用实验,将双黄连液连续稀释为8个浓度:30.0mg/ml、15.0mg/ml……0.3mg/ml,分别加入各孔细胞,观察其毒性作用;(2)双黄连对新生大鼠原代心肌细胞外柯萨奇B_3型病毒抑制作用实验,将双黄连液连续稀释为8个浓度:2.00mg/ml、1.00mg/ml……0.02mg/ml,分别与100TCID_(50)柯萨奇B_3型病毒作用后,加入各孔细胞,观察致细胞病变效应(CPE),测定感染36小时后细胞上清液中的病毒滴度及肌酸磷酸激酶的活性;(3)双黄连增强新生大鼠原代心肌细胞抗柯萨奇B_3型病毒实验,将双黄连液连续稀释为8个浓度:2.00mg/ml、1.00mg/ml……0.19mg/ml,加入各孔细胞,培养48h后,再加入100TCID_(50)柯萨奇B_3型病毒,培养36h,观察细胞病变;(4)双黄连对新生大鼠原代心肌细胞内柯萨奇B_3型病毒抑制作用实验,在各孔细胞中加入100TCID_(50)柯萨奇B_3型病毒,1h后,将双黄连液连续稀释为8个浓度:2.00mg/ml、1.00mg/ml……0.02mg/ml,加入各孔细胞,培养36h,观察细胞病变。以上各组均设病毒和细胞对照组。结果:高浓度的双黄连(>0.5mg/ml)对新生大鼠原代心肌细胞有毒性作用;0.50mg/ml,0.25mg/ml,0.125mg/ml双黄连能够显著抑制柯萨奇B_3病毒对新生大鼠原代心肌细胞的CPE,降低细胞上清液的病毒滴度,减少感染心肌细胞肌酸磷酸激酶的释放(分别和病毒对照组相比,P<0.01),但不能增强心肌细胞本身的抗病毒能力,也不能抑制进入细胞内的柯萨奇病毒。结论:双黄连可明显抑制柯萨奇B_3病毒感染的新生大鼠原代心肌细胞的CPE,其主要作用环节在细胞外,机制可能与阻止病毒吸附有关。……   
[关键词]:双黄连;柯萨奇病毒;新生大鼠原代心肌细胞;抗病毒作用
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:安徽医科大学2002年