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心力衰竭不同时期心室组织中细胞增殖和凋亡相关基因蛋白表达改变的研究

李针

  实验目的:有学者提出心力衰竭从本质上说是一种“超负荷心肌病”,由于心肌储备力耗竭导致心功能恶化。有证据表明,在心肌超负荷等病理刺激下,心脏细胞内一系列基因发生异常表达与调控变化,造成心肌组织中相关基因蛋白表达的改变,导致心肌储备力的耗竭。我们选择与细胞增殖、增生和凋亡相关基因进行研究,观察心肌梗死所致心力衰竭大鼠模型不同时期心肌组织中心肌型肌动蛋白α(α-cardiac actin)、Gα_(11)、p21、p27、p57、hhLIM、HCY-2、HRG-1等8种基因蛋白表达情况,探讨以上基因蛋白的表达变化在心力衰竭的发生、发展演变中的分子生物学机制,为临床上有效防治心肌肥厚和心力衰竭提供新的方法和思路。实验方法:本实验通过结扎雄性SD大鼠左冠状动脉前降支,建立心肌梗死所致心力衰竭模型。心衰模型心肌组织标本的留取采用术后3天、1周、2周、3周、6周五个时间段,运用免疫组化、Western Bloting和图像分析技术,检测心肌组织中α-cardiac actin、Gα_(11)、p21、p27、p57、hhLIM、HCY-2、HRG-1基因蛋白的表达水平。心肌梗死致心力衰竭大鼠模型术后3为天急性心肌梗死期,术后3周为心肌肥厚期,术后6周为心力衰竭期。结果:一、心肌型肌动蛋白α表达量在由急性心梗至心力衰竭演变过程中,呈先升高后下降的趋势。(1)Western印迹光密度值:心力衰竭模型术后3天、3周和6周组心肌型肌动蛋白。光密度值分别较对照组增加24%(P<0.001)、47%(P<0.001)和12%(P<0.05);而心力衰竭模型术后3周组(心肌肥厚期)心肌型肌动蛋白。光密度值较术后3大组(急性心肌灿死期)增加了川%叩<0ml),木后6周组(心力衰竭期)心肌型肌动蛋白。光密度值较术后3周明显-下降了25%叩<0001):但在假手木对照组术后3大、3周和6周心肌型肌动蛋臼O蛋白的表达量无明显差别叩>0刀引。门)免疫组化的PU值:Z周实验组分别是3天、6周实验组的1.爿倍o<0刀01和1.09o、0刀引倍,并较对照组显著增加(P<0刀1)。二、G oil蛋白表达量在心衰过程中的变化(免疫组化PU值卜()心力衰竭模型术后1周、2周和3周组G。11蛋臼PU值分别是对照组的1.17倍(P<0刀引、1.刀倍(P<0刀1)和1.”倍(P<0刀001),但心力衰竭换型术后 3天和 6周组 G。11 m臼表达垦较对照组无明显差异o>0刀5)。(2)心力衰竭模型术后3周组(心肌肥厚期)G oil蛋白PU值是3天组(急性心肌梗死期)的2.03倍(P<0.000),而术后6周组(心力衰竭期)G Q;;蛋白 PU值与术后 3周组相比明显下降了 53O(P<0.0001人三、在心衰进展过程中PZI、P27、P57蛋白表达量均呈先升高后下降的趋势,尤以P57变化显著。Western印迹光密度值。()心力衰竭模型术后3周和6周组PZI蛋白光密度值分别较对照组增加35%0<0.001L16%(P<0.05),但术后3天组PZI蛋臼光密度值与对照组相比无显著差异(P>0.05);心力衰竭模型术后3周组(心肌肥厚期)n1蛋白光密度值较术后3天组(急性心肌梗死期)增加川%(P<0刀01),而术后6周组(心力衰竭期)PZI 蛋白光密度值较术后3 周明显下降了17%(P<0.01);但在对照组术后3天、3周和6周组PZI蛋白表达量无明显差别o>0刀5)。Q)心力衰竭模型术后3大、3周和6周组n7蛋白光密度值较对照组增力IZ%(P<0*5)、65%(P<0*01)走26%叩<0刀1);心力衰竭模型术后3周组(心肌肥厚期)P27蛋白光密度值较术后3天组(急性心肌梗死期)增加59%o<0刀01),术后6周组(心力衰竭期).4-P27蛋白光密度值较术后3周明显下降了280(P<0.00)。门在对照组术后Z大、3刑和6周组R7蛋白表达量无明显差别(P>O刀5)。()心上力衰竭模型术后 3天、3周和 6周组 P57蛋白光密度值分别较对照组增加14%J<0刀1)、%%o<0刀01和13%(P<0刀1);且心力衰竭模型术后3周组(心肌肥厚期)P57蛋白光密度值较术后3天组(急性心肌梗死期)增加牡%o<0刀01),而术后6周组(心力衰竭期)N7蛋白光密度值较术后3周明显下降了引%o<0刀01);但在对照组术后3天。3周和6周组P57蛋白的表达量无明显差别(P>0刀5)。四、hhLIM蛋白在心力衰竭进程中表达变化:()心力衰竭模型术后3天、3周和6组hhLIM蛋白光密度值分别较对照组分别增加18%(P<0刀5)、盯%(P<0刀01)和19%(P<0刀5);(2)心力衰竭模型术后3周组(心肌肥厚期)bLhLIM蛋白光密度值较术后3天组(急性心肌梗死期)增加41%(ho.om),但术后6周组(心力衰竭期)MMM蛋白光密度值却较术后3周组明显下降了30%卯<0刀01人()但在对照组术后3天、3周和6周组组讪NM蛋白的表达量无……