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热激转录因子基因转化不结球白菜的研究

黄梦苏

  不结球白菜(Brassica campestris ssp.chinensis Makino)原产于中国,在我国“菜篮子工程”中占有重要地位。由于不结球白菜是性喜冷凉的秋栽作物(属避热类型),因此高温胁迫对其夏季的产量和品质影响很大。有关不结球白菜耐热性研究及其常规育种已有进展,但仍不能满足生产及消费需要。为此本研究采用现代生物技术手段,将来自拟南芥的耐热基因—热激转录因子基因(HSF)导入不结球白菜基因组中。研究表明,在三种不结球白菜品种“苏州青”、“亮白叶”、“耐寒AB系”中,“苏州青”在MN+BA2(mg/l)+NAA0.45(mg/l)+AgNO_34(mg/l)培养基中得到不定芽的离体再生频率最高。“苏州青”的再生试验研究得到其稳定的再生体系。在培养基中分别添加脱落酸(ABA)和赤霉素(GA),结果表明ABA在硝酸银(AgNO_3)存在时可以明显提高苏州青不定芽再生频率,其最高再生频率为60.4%。而GA对不定芽的再生影响则比ABA强烈。以上结果说明不结球白菜的不定芽的诱导对ABA及GA敏感。另外,试验显示诱导出的不结球白菜再生苗对卡那霉素(Km)敏感,其最适浓度为10~15mg/l。通过农杆菌介导的转基因试验,首次将HSF基因顺利整合到了“苏州青”基因组中,并得到PCR及其PCR-Southern结果的验证。随后的RT-PCR结果显示HSF基因已经在“苏州青”基因组中得到了表达。本研究首次进行了利用花粉管通道法注射外源基因于不结球白菜上的尝试。GUS检测、GUS基因的PCR-Southern及HSF基因的PCR-Southern检测结果显示,外源DNA经过花粉管通道进入植株基因组是可行的,利用此法同样可以得到转基因不结球白菜。最后讨论了热激转录因子HSF基因转化不结球白菜的安全性问题。……   
[关键词]:不结球白菜;转化;农杆菌介导;花粉管通道法;HSF基因
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:南京农业大学2002年