手机知网 App
24小时专家级知识服务
打 开
手机知网|搜索

耐氟喹诺酮类药物猪源致病性沙门氏菌gyrA基因PCR-RFLP及序列分析

谭炳乾

  本研究应用标准单因子血清,对四川不同地区规模化猪场分离的16株猪源致病性沙门氏菌进行了血清型鉴定,鉴定出鼠伤寒沙门氏菌(O:1,4,5,12;H1:i;H2:1,2)6株、猪霍乱沙门氏菌(O:6,7;H1:c;H2:1,5)5株、肠炎沙门氏菌(O:1,9,12;H1:g,m;H2:-)3株、德尔俾沙门氏菌(O:1,4,[5],12;H1:f,g;H2:[1,2])2株。对猪源致病性沙门氏菌的血清型鉴定结果在四川还未见报道。测定了16株致病性沙门氏菌对12种抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC),依照美国临床实验室标准委员会(NCCLS)标准(1990)判定菌株耐药性。结果表明,16株致病性沙门氏菌对12种常用抗菌素的耐药率在31.3%-93.8%之间,并已经出现了氟喹诺酮类耐药菌株。本研究重点分析了16株菌对氟喹诺酮类(FQNs)药物的耐药性,结果表明:16株菌对诺氟沙星、环丙沙星、沙拉沙星、单诺沙星和氧氟沙星等(NOR、CIP、SAR、DAN、OFL)的耐药率在31.3%-56.3%之间。在国内首次应用PCR技术对猪源致病性沙门氏菌的gyrA基因进行了研究。根据发表的沙门氏菌gyrA基因序列设计引物,对16株猪源致病性沙门氏菌gyrA基因进行PCR扩增,16株菌均获得以染色体为模板的特异性扩增产物,1株鼠伤寒沙门氏菌同时获得了以质粒为模板的特异性扩增产物,扩增产物长度为668bp。本研究在国内首次采用限制性酶切片段长度多态性分析(PCR-RFLP)对猪源致病性沙门氏菌gyrA基因进行了检测。对所试菌株染色体的PCR产物行HinfI酶切后电泳检测表明,CIP高敏菌株(6株)得到预期大小为363bp、206bp、99bp的3个条带;而耐药菌株和中敏菌株(10株)电泳检测到大小为363bp和305bp的2个条带。对1株耐药菌株的染色体PCR扩增产物进行了测序,与Griggs等在genbank中注册的沙门氏菌gyrA基因QRDR的编码序列进行比较,同源率为95.8%。氨基酸序列比较表明,83位氨基酸出现了丝氨酸→苯丙氨酸的置换。本研究通过试验条件的筛选,建立了PCR-RFLP检测猪源致病性沙门氏菌gyrA基因点突变的方法,可用于沙门氏菌氟喹诺酮类耐药性的分子水平检测和流行病学监测。……   
[关键词]:沙门氏菌;血清型;氟喹诺酮类耐药性;PCR-RFLP;gyrA;QRDR
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:四川农业大学2002年