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博落回杀螨活性成分的研究

巩忠福

  随着人们卫生及环境意识的增强,环保、无公害药物的研制已经成为未来药物发展的主导方向。有毒植物是我国传统农药(包括杀螨剂)的主体,从有毒植物中寻找新的活性杀螨剂或杀螨药物前体,不仅是有效创制新药的经济、快捷途径,而且也是对有毒植物资源及植物毒素的合理开发与利用。本研究正是以此为出发点开展了活性筛选、成分预试、杀螨活性成分的跟踪分离、波谱分析与结构解析以及单体杀螨活性观察等工作,并取得了以下结果:1.具有杀螨活性植物的筛选:采用点滴法离体杀螨试验观察了19种植物甲醇提取物对家兔耳痒螨(Psoroptes cuniculi)成虫的杀灭活性。试验结果表明,50%浓度的百部、桔皮、白鲜皮、苦参、苦楝皮、博落回和打破碗花花等7种植物的提取物均可在4h内杀死全部实验痒螨,其中百部和博落回只需1.8h和1.7h,杀螨活性最为突出,相当于4mg/L浓度的阿维菌素水溶液。2.三种杀螨植物的化学成分预试:采用试管法博落回、打破碗花花和杠板归等三种植物的化学成分做了预试。试验结果表明,博落回的化学成分以生物碱为主,打破碗花花以皂甙类成分为主,杠板归主要化学成分为黄酮类和蒽醌类成分。3.博落回杀螨活性成分的提取与初步分离:以5%盐酸甲醇反复冷浸博落回全草的干燥粗粉(3.5kg),减压蒸去溶剂获得总提取物;总提取物用热水溶解,酸化,滤出不溶物M1(110g),氯仿萃取出水相中脂溶性部分M2(30g),继而碱化水相,氯仿萃出脂溶性部分M4(19g),残余水相部分烘干得M3(100g);对M1,M2,M3与M4四部分的杀螨活性检测结果表明,以生物碱为主要成分的M4部分杀螨活性最突出。4.博落回杀螨活性成分的琅踪分离:M4样19g上硅胶柱,以氨水饱和的石油醚:乙酸乙酯:甲醇溶剂体系梯度洗脱(10:1:0~0:1:1),每200mL收集一份,TLC监测成分的变化,合并成分相似者,将M4部分分为F1(1g)、F2(3g)、F3(5.5g)、F4(3g)与F5(3g)五个极性段;F2段柱层析,石油醚:乙酸乙酯:三乙胺(4:1:0.05)洗脱,得到F21与F22两个流分,F21再次经过柱层析后经甲醇/乙酸乙酯重结晶得到化合物MC3(无色针状结晶),F22在石油醚:乙酸乙酯:三乙胺(4:1:0.2)体系中展开,TLC制备得到两个主要成分,经丙酮重结晶后得化合物MC6(淡黄色无定形粉末)与MC7(白色针状结晶);F3段柱层析,以石油醚:乙酸乙酯:三乙胺(4:1:0.05)为初始溶剂逐渐增大极性洗脱,得到F31、F32与F33三个流分,F31柱层析,石油醚:二氯甲烷:丙酮(2:0.5:0.2)洗脱得化合物MC9(黄色针状结晶),F32经乙腈重结晶后得到化合物MC1(白色无定形结晶),F33上硅胶柱,石油醚:二氯甲烷:三乙胺(3:1:0.1)洗脱,甲醇重结晶得化合物MC2(五色柱状结晶);F4段柱层析,石油醚:11博落回杀螨活性成分的研究乙酸乙酯:三乙胺*:1.5:0.1)洗脱得到F4与F42流分,F4经石油醚:乙酸乙酯:甲醇:三乙胺O.5:4:0.5:0*展开薄层层析制备后得到化合物MC(白色针状结晶),F42经氯仿重结晶得化合物MC(黄色针状结晶卜5.博落回生物碱理化常数的测定与波谱分析:通过熔点、比旋光度的测定,TLC检查以及m,EIMS,‘H NMR,‘七 NMR,DEpT等波谱学分析对几种化合物的结构进行解析,化合物 MCI,MCZ与 MC10分别被鉴定为普洛托品(ProtoPinX a拐隐品碱(a一allocryPto*ine)与刁鬃碱(berberine),MC3,MC6,MC7,MCg与MC 11的波谱学与博落回属植物己见报道的成分有较大不同,尚待进一步作出确切鉴定。化合物MC,熔点203~204C,比旋光度0,EIMS给出分于离子峰353,IR在1672处有吸收峰(碳基)罗二*C NMR(CDCI,6巾p3):31人 41.4日 46刀, 50.8, 57.5, 100.7目 101刀, 106.6,107.9,110.2,117.4,124.8,128*,132.3,135.7,145.7,145.8,146二,147.9,DEPT谱显示一个甲基碳,六个亚甲基碳,四个次甲基碳与八个季碳,’H NMR(CDC13,sbo3)1.98,2.3~3.l,3.3叶.0,5.93,5.95,6.65,6.71,6.91。化合物 MCZ,熔点 160~161℃,卜旋光度0,EIMS给出分子离子峰 369,IR在 1645处有吸收峰(碳基),‘3C NMR(CDCI,6/pp叫:31.9,41刁,的刀,SO.2,55.5,57.2,60石,101刀,109刀,门0.2,门0.5,127.4,128.1,129刀,132.3,135.5,146*,147.l,147.9,151.4,DEPT谱显示三个甲基碳,五个亚甲基碳,四个次甲基碳与八个季碳,’H NMR(CDC13,6/pp ):1.93,2.3-3.63,3.79,3.86,5.95,6.64,6.87,6.96。化合物MC10,熔点143叶,碘化秘钾试剂显色阳性,与小聚碱标准样品 TLC时 Rf值相同,混合样熔点不下降。6.博落回中8个生物众单体的杀螨活性观察:通过体外杀螨试验观察了8个生物碱单体在不同浓度下对家兔耳痒螨成虫的杀灭效果,结果表明普洛托品显示出较好的杀螨活性,1%浓度3小时,0.5%浓度7小时可杀死全部试验螨虫,效果稍逊于百里酚,同时化合物MCg、小劈碱以及FS极性段也显示出微弱的杀螨活性。综上所述,本研究得出以下结……   
[关键词]:博落回;活性;分离;生物碱;兔痒螨
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:西北农林科技大学2002年