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限制生长法保存几种果树离体种质资源的研究

张演义

  果树种质资源的保存意义重大,方法众多,其中建立在组织培养基础上的限制生长保存方法是一种非常重要的方法。本试验建立了苹果(罗6、铃铛果等)等的茎尖培养体系;并以其为试验材料,研究了果树茎尖培养苗保存过程中不同添加物和不同培养条件对保存效果的影响;对保存前后的茎尖培养材料进行了RAPD分析;研究了保存前后和各种保存方法中果树茎尖培养材料的遗传变异;对保存1年后的罗6进行了扩繁和生产的研究。主要结果如下:1.建立了罗6茎尖培养体系,为进一步的保存研究和遗传变异研究提供了材料对茎尖培养苗进行了大量的试验及繁殖,筛选出适宜快繁的一系列培养基。罗6的分化培养基以MS+BA_(0.45)+IBA_(0.1)为最佳,试验表明在该配方下分化率高,叶色绿,苗木健壮。对苹果无菌苗建立过程中的褐化现象进行了较为系统的研究,初步找到了克服和减轻褐化的措施。2.改进和完善了果树茎尖培养苗的限制生长保存法利用减少瓶内空气、添加2%甘露醇、5℃低温、减少光照时间为每天6小时或减少光照强度为500Lux、加大琼脂含量为11g/L、减少蔗糖含量为10g/L以及添加10g/L活性碳等方法对苹果、草莓等果树材料的茎尖培养苗进行了限制生长保存,保存时间最长现已达到18个月,保存的果树茎尖培养苗生长速度远低于对照,转入正常培养基后能正常生长、分化。对保存过程中出现的玻璃化现象采取了一些解决措施。3.对保存1年后的果树茎尖培养材料的遗传变异进行了RAPD分子标记检测利用14个随机引物,对用不同方法保存的苹果和草莓等果树的不同品种保存前后利用RAPD方法进行了分子检测,共得到224条带,发现斑带整齐划一,没有异带产生,表明保存前后基因型基本一致,没有发现变异现象。4.建立了系统的保存果树离体种质资源的技术程序在保存果树茎尖培养苗前,首先将其放在正常生长分化的含7g╱L琼脂、30g/L蔗糖的固体培养基中,每天2000Lux光照12小时,于25℃度等条件下进行培养。二周后待茎尖培养苗生长较为健壮时,用青霉素玻璃小瓶作为培养瓶,剪取茎尖培养苗并将其接种在含有2%甘露醇的正常生长MS培养基中,放于5℃下光照培养箱中,培养条件设为每天2000Lux光照6小时,进行培养保存。至少每隔二周应该抽查茎尖培养苗生长状况。5.对保存后的罗6进行了扩繁和生根研究保存后的罗6伸长培养基以MS+KT_(2.0)+NAA_(0.1)为最佳,该配方下苗子伸长现象明显,苗子长势壮,叶子肥大;瓶内生根培养基以1/2MS+IBA_(0.2)较为理想,9天后开始生根,数量较多,生根后的茎尖培养苗生长健壮,有利于移栽成活,而滤纸桥瓶外生根采取先炼苗9天,然后蘸取500ppm的ABT生根剂进行滤纸桥生根效果较好。……   
[关键词]:果树;种质;茎尖培养;离体保存;限制生长法;RAPD分子标记
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:山东农业大学2002年