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蛋白质的液相色谱复性

黄亚渝

  本文研究了变性蛋白质在不同种类液相色谱上的复性情况。分别用高效疏水色谱(HPHIC)和高效离子交换色谱(HPIEC)对盐酸胍、尿素、SDS变性的11种蛋白质进行了复性和保留行为的研究。11种蛋白质中有5种可以在HPHIC上得到复性。结果显示:其中分子量小、结构简单的蛋白质复性效果好,分子量大、含有辅基、结构复杂的复性效果差。复性效果好的蛋白质不仅复性效率高,而且保留时间、峰型及Z值均与天然蛋白相似。盐酸胍变性的蛋白质复性后的质量回收率和活性回收率均高于尿素,SDS变性的蛋白质构象难以恢复,复性效果最差。在HPIEC上,复性的蛋白质也表现出相似的结果。但是只有3种蛋白获得复性,而且质量和活性回收率普遍低于HPHIC,Z值、保留时间虽然与天然蛋白相近,但峰型相对较差,复性条件的选择也较HPHIC困难。蛋白质在疏水作用色谱上的复性效果优于离子交换色谱。其次,我们又用二硫苏糖醇(DTT)将胍变及脲变核糖核酸酶(RNase)的二硫键打断,加入氧化型谷胱苷肽(GSSG),然后用HPHIC、HPIEC和排阻色谱(SEC)对其进行复性。对二硫键断裂的RNase在三种色谱上的复性效果进行比较的同时,还研究了色谱固定相、变性剂、氧化-还原剂对复性的第四军医大学硕士学位论文影响。研究发现:三种色谱固定相均对RNase的复性有所贡献。RNase在HPHI、HPIEC上的质量和活性回收率高于SEC。用三种色谱法对RNase进行复性时,在流动相中加人低浓度的变性剂门刀mowGuHCI或ZomollLUea),可以提高RNase的复性效率。也可以通过选择合适的氧化剂、还原剂的比例提高复性效率,如狐变RNase在Dry与GSSG的浓度比为1:2*,腺变RNase为1:2七时,RNase的质量和活性回收率较高。……   
[关键词]:液相色谱;复性;蛋白质;高效疏水作用色谱;高效离子交换色谱;排阻色谱
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:第四军医大学2002年