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致病性迟缓爱德华菌的检测及其胞外产物的免疫效果评价

熊清明

  迟缓爱德华菌(Edwardsiella tarda,Et)对多种动物致病,其危害日益突出。为控制和预防该病,本文对致病性Et的检测和保护性抗原进行了研究。本试验建立了致病性Et检测的Dot-ELISA,并以此为基础构建检测试剂盒。以Et强致病株JEL4的胞外产物ECP为抗原制备兔抗血清,用于Dot-ELISA检测25株Et的ECP,同时对Et的溶血素和胞外蛋白酶(ECPase)进行检测,结合小鼠和剑尾鱼的致病性试验。结果表明,溶血素与菌株的动物致病性良好相关,致病株均为溶血素产生株,ECPase与致病性无关。JEL4 ECP的Dot-ELISA结果与动物致病性的符合率达100%。在此基础上,将ECP抗血清冻干作为核心试剂,并对Dot-ELISA的反应条件进行优化,构建了检测试剂盒。该试剂盒能快速、简便、特异、灵敏地检出致病性Et。以致病性Et JEL4的全菌灭活物(FKC)和ECP为免疫原免疫小鼠和剑尾鱼,7周后用JEL4和异源菌株进行攻击,评价了FKC和ECP的免疫保护效果。试验显示,免疫小鼠FKC组和ECP组均获良好保护;免疫剑尾鱼中,FKC和ECP组对同源菌株保护率分别为60%和100%。对异源菌株的攻击,均不能全部保护,但ECP组可明显延缓剑尾鱼死亡时间。根据已发表的Et溶血素基因序列,设计一对引物,扩增出含438bp阅读框的溶血素基因序列,连接到真核表达载体pcDNA3.1中,构建真核表达重组质粒pHL,脂质体法转染sp2/0细胞,SDS-PAGE显示有大小为16kD的表达蛋白产生。……   
[关键词]:迟缓爱德华菌;检测;免疫保护;ECP;Dot-ELISA;克隆与表达
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:南京农业大学2001年