手机知网 App
24小时专家级知识服务
打 开
手机知网|搜索

鱼类致病性嗜水气单胞菌检测方法的研究

王文东

  本课题在对我国不同地区鱼类致病性嗜水气单胞菌及相关菌株分离鉴定的基础上,建立了快速检测致病性嗜水气单胞菌的协同凝集试验和PCR方法。以灭活嗜水气单胞菌免疫注射健康家兔,制备高免血清。以富含A蛋白的葡萄球菌标准菌CowanⅠ制备SPA菌稳定液,与上述高免血清制备成SPA菌诊断液。检测结果表明,该法比同等条件下的玻片凝集反应敏感性高25~50倍。特异性试验表明,嗜水气单胞菌诊断液与豚鼠气单胞菌和温和气单胞菌不发生交叉反应。以国外报道的嗜水气单胞菌Aer基因全序列,从中筛选出1对引物用于PCR检测,以另1对引物扩增Aer基因的保守区,测定其序列后,重新设计1对对我国常见气单胞菌具有针对性和特异性的引物,用于PCR试验,并与SPA—CoA方法对照。结果显示,Aer基因的保守区616个碱基序列,国内分离株序列与国外发表序列同源性为92.05%。以此序列设计的引物扩增11株嗜水气单胞菌均得到预期的421bp条带。而温和气单胞菌、豚鼠气单胞菌及其它鱼类病原菌未见相应条带,但有些细菌能扩出条带,只是其大小与设计的不相符合,说明气溶素类基因可能存在于相关菌群中,其核酸序列在不同菌群之间存在较大差异。本研究建立了致病性嗜水气单胞菌的检测方法,用SPA—CoA方法可准确鉴定出嗜水气单胞菌,在大量样品的检测中可用于缩小检测范围,通过PCR检测可确定其是否具有致病性。二种方法的配合使用,可有效地检出致病性嗜水气单胞菌。……   
[关键词]:致病性嗜水气单胞菌;SPA—CoA;Aer基因;PCR检测
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:中国人民解放军军需大学2001年