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中性鞘糖脂表达与卵巢癌细胞株SKOV_3/AdrR多药耐药性关系的研究

袁匀

  目的:本实验主要讨论中性鞘糖脂(neutral glycosphingolipid,N-GSL)表达与卵巢癌细胞株SKOV_3/AdrR多药耐药性(multidrug resistance,MDR)的关系,探讨葡糖酰基鞘氨醇合酶抑制剂苯基棕榈酰胺吗啡丙醇(1-pheny1-2-palmitoylamino-3-morpholino-1-propanol,PPMP)在MDR逆转中的作用,了解PPMP抑制糖脂合成前后耐药细胞有关耐药性指标的改变。在中性鞘糖脂方面研究卵巢癌多药耐药的逆转,寻找新的耐药逆转剂。方法:用改良的Hakamori方法提取、纯化卵巢癌耐药系SKOV_3/AdrR和亲本敏感细胞SKOV_3的中性鞘糖脂,高效薄层层析(HPTLC)分析比较其单已糖酰基鞘氨醇(ceramide monohexoside CMH)差异,用PPMP作用于细胞后,再分析其变化,测定PPMP抑制中性鞘糖脂合成的作用。用MTT法(药敏检测)分析PPMP对细胞耐药性的影响。逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)方法分析PPMP对细胞mdr1基因mRNA的影响。流式细胞术测定mdr1编码产物P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的表达和细胞内罗丹明药物浓度(以研究P-gp的功能)。结果:耐药细胞SKOV_3/AdrR和亲本敏感细胞SKOV_3相比较,CMH含量有差异,耐药细胞高于敏感细胞,PPMP可抑制耐药细胞的CMH合成,抑制程度与剂量有关,5μmol/L、15μmol/L PPMP作用48h,细胞CMH受抑制率分别为40%、44%,25μmol/L PPMP作用细胞48h,CMH受抑制率为100%。PPMP可增加耐药细胞SKOV_3/AdrR对阿霉素的敏感性。SKOV_3/AdrR细胞mdr1表达阳性,而SKOV_3细胞mdr1表达阴性。5μmol/L PPMP、15μmol/L PPMP分别作用细胞48h,均可部分抑制SKOV_3/AdrR细胞mdr1表达,25μmol/L PPMP作用细胞48h可完全抑制SKOV_3/AdrR细胞mdr1表达。PE标记P-gp单克隆UIC2抗体的免疫荧光测定显示,SKOV_3/AdrR细胞的P-gp表达高于SKOV_3细胞,流式细胞术直方图可见SKOV_3/AdrR细胞的曲线明显右移,受PPMP作用后,SKOV_3/AdrR细胞P-gp表达降低。亲本敏感细胞SKOV_3内Rh123浓度(用平均荧光强度表示)高于相应的耐药SKOV_3/AdrR细胞,SKOV_3/AdrR细胞受15μmol/L、25μmol/L PPMP作用后,测其细胞内Rh123荧光强度平均值分别为389.98和426.08,与未用PPMP的SKOV。八drR相比有显著性差异u幻.05人即PP皿可使P唱p介导的药物外流减少,这种调节作用与PPNfl,剂量有关。结论:葡糖酚基鞘氨醇合酶抑制剂PPMP抑制中性鞘糖脂表达,可逆转卵巢癌的多药耐药性,影响 mdrl转录水平、翻译水平和 P唱p外排泵功能。……   
[关键词]:卵巢癌;多药耐药性;中性鞘糖脂;基因表达;P糖蛋白;流式细胞术
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:第一军医大学2001年