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日本对虾肝胰腺及血细胞的培养

王宏伟

  本文研究了日本对虾肝胰腺和血细胞的培养,并采用培养细胞的RNA/DNA值进行细胞生长状况的评定。首先,在日本对虾的肝胰腺和血细胞原代培养的基础上,利用RNA/DNA值进行不同pH值培养基的比较,认为对于肝胰腺细胞pH7.6为最适值,对于血细胞pH7.2为最适值,同时利用光镜及电镜做了一些形态和结构上的观察,在电镜下观察到的日本对虾血细胞为无颗粒状细胞。其次,摸索了肝胰腺细胞的培养条件,实验采用199培养基,并在其基础上添加胎牛血清、NaCl、CaCl_2、MgCl_2、NaHCO_3、葡萄糖和其它无机离子,渗透压用NaCl等调节,分别在三种pH值、三种渗透压和三种Zn~(2+)浓度下,原代培养日本对虾肝胰腺细胞,并以RNA与DNA的比值为指标评定其生长状况。结果为日本对虾肝胰腺细胞在pH7.6、渗透压为730mmol/Kg和Zn~(2+)浓度为80μg/L时,生长最好。然后,探讨了金属离子对培养日本对虾肝胰腺细胞的影响,在培养基中加入Ca~(2+)、Mg~(2+)、Ca~(2+)+Mg~(2+)和Zn~(2+),以测定细胞的RNA/DNA值作为评价指标,结果表明,加入适量金属离子可促进细胞生长,各组细胞的RNA/DNA值均高于对照组,培养基中混合加入Ca~(2+)和Mg~(2+)有助于细胞贴壁生长。最后,实验在199培养基中加入促进细胞生长的亚油酸,对日本对虾肝胰腺细胞进行传代培养,测定传代细胞的总磷和无机磷含量,当亚油酸的加入量为16×10~(-5)M时,细胞的总磷和有机磷含量均为最高。总之,日本对虾细胞培养需要适宜的pH和渗透压,培养基中加入适量的金属离子Ca~(2+)、Mg~(2+)和Zn~(2+),可促进细胞生长,混合加入Ca~(2+)和Mg~(2+)有助于细胞贴壁生长,加入适量亚油酸有利于细胞生长。本实验选取日本对虾最易患病的肝胰腺和与免疫机能有关的血细胞进行培养,摸索了一些较适宜的培养条件,为建立细胞株(系)以供病毒的分离、纯化,并进行各种特性的分析,进一步研究单克隆抗体奠定基础。同时,为培养对虾的免疫细胞并研究对虾免疫机能和筛选免疫增强药物提供手段,从而为解决虾病防治问题开辟一条有效途径。……   
[关键词]:原代培养;传代培养;肝胰腺;血细胞;日本对虾
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:河北大学2001年