手机知网 App
24小时专家级知识服务
打 开
手机知网|搜索

TTV家族新成员SEN Virus感染状况和基因序列分析

范骏

  在肝炎病原学诊断过程中,有相当一部分病例无法用已经建立的甲、乙、丙、丁、戊型肝炎的实验室诊断方法进行病原学分型,1997年12月Nishizawa采用代表性差异分析(representational difference analysis,RDA)技术从一例非甲~非戊型输血后肝炎患者血清中成功获得500碱基长的基因克隆(N22克隆),称为输血后传播病毒(transfusion transmitted virus,TTV)。TTV广泛存在于世界各地,不仅在非甲~非戊型肝炎患者中存在,而且在各种甲~戊型肝炎患者、血液透析患者、血友病患者、静脉毒瘾者及正常人群和职业献血员中存在。TTV的基因型存在高频率变异,其基因型、病因学机理、传播途径尚不完全清楚。2000年9月Fiordalisi等在GenBank登录SEN Virus(SENV)基因全序列,同年Umemura等报道SEN Virus与输血后感染肝炎有关;随后Tanaka等发现其核苷酸和核苷酸编码的氨基酸序列与TTV家族具有同源性,证实SENV是TTV家族的新成员,其核苷酸序列存在高度变异。Bowden和Allain报道SEN Virus可能是潜在的非甲~非戊型肝炎的致病病毒,但是尚无有力的证据证明。国内尚无有关SEN Virus的报道。为了了解SEN病毒感染的临床意义,探索TTV家族新成员SEN病毒基因变异的多样性,为免疫诊断、预防、治疗非甲~非戊型肝炎提供理论依据,我们对495份不同人群的血清标本(44例非甲~非戊型肝炎患者、150例甲~戊型肝炎患者、ZI例ALT升高的婴幼儿、86例血透患者、35例静脉毒痫者、引例正常体检人群和 108例健康助血.员),-采用巢式PCR方法,以扩增TTV原型片段为对照,研究SENV在上述人群中的感染状况;对其中的阳性**R片段进行纯化、汝接及转化,获取重组质粒,进行**A序列分析。实验结果菜明,TTV PCR出现人小为 196hp片段,与预计 PCR产物人小一致。SENV PCR出现预FJJ 360hp片段,同时也出现比 360hp长的片段。在本文研究的不同人群中的检出如卜 TTV和 SENV的检山率分别为7.5%和门.9%;TTV在患病者(非甲~非戊江仰‘炎患者、甲~戊型肝炎患者、ALT升高的婴幼儿、血透患者、静脉毒痫者、)和健康人群(助血.员。止常体检人群)中的检出率分别为15.8%、10.l%,两者无显著性差异。而SENV的检出率分别为门刀%、0刀%,两者有显柠性差异;SENV利 TTV在健康人群中的检出率分别为0.0%和10.1%,两者有显著性差异;SENV和TTV在患病者中检出率分别为11.0%和15.8%,同时川性的检出率为3.8%,两者有显著性差异。SENV在ALT升高患者(非甲~非戊型肝炎患者、甲~戊型肝炎患者、ALT升高的婴幼儿)和在川。T上常的患者(包括血.透患者、静脉毒痛者)中的检出率为14.0%、5.8%,两者有显著性差异;而TTV的检出率分别为 17.7*、12.4%,两者无显柠性差异。将I!II性 PCR”TV片段、SEN VK片段、短片段被克隆至pGEM-T-Easy载体之中,分别命名为pGEM-TTV、PGEM-SENVL、PGEM-SENVS,选取经酶切鉴定的重组质粒,进行DNA序列分析。川 DNA Toolss.1和 DNAStar软件处理、分析数据。TTV DNA片段序列与 TTV1、A278原地(AB008394)卜较芬析的序列同源性为97.4%。三个PGEM-SENV长片段和两个短片段进行测序,与SENV的序列(AX025667)比较分析,同源性分别为 87.7%、76.1%、88.2%、72.7%$11 78.8%。以上研究表明:首次发现我国存在 SEN VirSS散发感染,并且有与 TTV合并感染存在。SENV可能是一种重要病原体,临床检测SENV可能更有2意义。我国存在不同于 SEN Virus(AX025667)的变异株;同一患者存在两种SEN V变异株的复合感染;SENV变异株其氨基酸序列与TTV家族成员有一定程度的同源性。……   
[关键词]:SEN Virus;TTV;感染;序列
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:浙江大学2001年