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草鱼血清对嗜水气单胞菌天然抗性成分的研究

习彩霞

  嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,Ah)的感染严重影响养殖业的发展,鲤科鱼所受损失最严重,但鲤科鱼中的草鱼对该病不易感,原因何在,值得探讨。本试验从Ah的毒力因子胞外蛋白酶(ECPase)和外膜蛋白(OMP)着手,研究了草鱼对Ah天然抗性产生的物质基础。在建立间接原位消化试验方法的基础上,证明草鱼血清中具有抗ECPase的成分;定量抑制试验表明,40μl草鱼血清能抑制85%工作浓度的酶活性。经(NH_4)_2SO_4沉淀、Sephadex G100、DEAE-Sephadex A50层析,对抗性成分进行纯化,间接原位消化法及酪蛋白消化抑制法鉴定,纯化物具有抗ECPase活性。经SDS-PAGE确定其分子量为80,000。等电聚焦分析确定其等电点为5.2,在pH5-8抗性成分较稳定,胰蛋白酶抑制试验表明,50μl抗性成分能抑制100μg胰酶的活性,其在整个草鱼血清中占总蛋白的23.57%,将草鱼血清中存在的抗ECPase成分定名为草鱼人α巨球蛋白同源物(αMh-gc)。但免疫电泳分析显示,血清中提取的αMh-gc与抗人α_2M抗体之间无免疫交叉反应。草鱼血清的各成分经Dot-ELISA阻断试验分析表明,血清中具有β迁移率的成分能与OMP结合。体表粘液及肠粘液中也发现有相似的抗OMP成分,SDS-PAGE、免疫转印确定血清中抗OMP成分分子量为66,000,取名为草鱼抗膜蛋白(AntiMP-gc)……   
[关键词]:草鱼血清;PAGE间接原位消化;Dot-ELISA阻断;体表粘液;肠粘液;ECPase;OMP
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:南京农业大学2000年