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非洲猪瘟的间接ELISA诊断试剂盒的研究

马世东

  用带有编码非洲猪瘟病毒衣壳蛋白P72基因的重组杆状病毒(Bacp72)作载体,在sf细胞中表达并得到重组P72蛋白,SDS—PAGE可得到分子量在72KDa左右的电泳带。用标准阳性非洲猪瘟血清作ELISA检测其具有生物学活性。用P72作为间接ELISA法的包被抗原,对ELISA反应条件进行优化。确定最佳包被液为PBS(PH7.2)、最佳封闭液为1%PGT、最佳血清稀释液为4%PEG6000/PBS、最佳冲洗液为0.5MNaCl/0.5%Tween20/PBS(PH7.2)。本实验ELESA反应体系采用50μl的微量法,节约试剂及抗原。反应在2小时内即可完成,达到了快速诊断的目的。包被了抗原并用封闭液封闭后的酶标板密封后保存于-20℃的冰箱中,至少可以保存5个月。阻断试验和交叉试验表明ELISA法有良好的特异性。问接ELISA比Dot—ELISA法具有更高的灵敏性。血清学调查没有得到阳性结果,与我国实际情况相附。用Bacp72表达的非洲猪瘟病毒P72蛋白抗原作为间接ELISA的检测抗原来检测非洲猪瘟具有快速、简单、无感染的特点。本实验对非洲猪瘟ELISA检测试剂盒的最终组装提供了实验依据。……   
[关键词]:非洲猪瘟;P72蛋白;Bacp72;ELESA
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:新疆农业大学2000年