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影响甘蔗原生质体分离、培养因素的研究

洪翠

  本文选用野生种福州金山割手密、中国种松溪竹蔗、热带种Badila和栽培品种新台糖15、闽糖70/611等5种甘蔗基因型作为供试材料。选用甘蔗幼叶诱导形成愈伤组织,继代培养后,挑选胚性愈伤组织进行悬浮培养,将培养物中小而圆的细胞富集,用于分离原生质体。进行了纤维素酶浓度、酶解时间、甘露醇预处理对甘蔗悬浮细胞原生质体分离的影响研究;比较不同甘蔗基因型间以及同一材料主茎与分蘖茎间原生质体分离和培养的差异;比较不同外源激素配比和培养方式对原生质体再生细胞分裂频率的影响,并研究了原生质体再生愈伤组织继代和分化表现。结果表明:1)悬浮细胞释离原生质体最佳的纤维素酶浓度范围为1.0%~1.5%,此浓度下原生质体的产量和活力均较高。纤维素酶浓度过高或过低均使产量和活力降低。2)悬浮细胞原生质体释离过程中,原生质体产量和活力随酶解时间的延长呈先升后降的趋势。但产量与活力的高峰期不同步,一般活力的高峰期先于产量的高峰期1~2个小时(0.5%纤维素酶处理的除外)。对不同基因型材料的酶解时间进程研究结果表明:热带种和栽培品种悬浮细胞原生质体酶解时间应以7~8个小时为宜,野生种以9~11个小时为宜,这样均有利提高产量和活力。3)不同基因型悬浮细胞得到的原生质体的产量和活力存在明显的差异,在供试的5种基因型中,栽培品种闽糖70/611原生质体的活力和产量均最高,野生种福州金山割手密最低。4)甘露醇预处理可以提高悬浮细胞原生质体的活力,一定浓度和一定时间的甘露醇预处理可以显著提高甘蔗原生质体的产量。以浓度为0.85M的甘露醇预处理15min的效果最好。供试材料新台糖15号每克悬浮细胞培养物可以分离得到74.00X 10’个有活力的原生质体。5)不同激素配比下原生质体的分裂频率以及愈伤组织形成等情况差异显著,其中NAA+KT处理有利于原生质体再生细胞分裂的启动;NAA+2,4D处理有利于再生细胞团持续分裂以及愈伤组织的形成。6)不同的培养方式中,以先液体一后包埋法效果最好,从原生质体再生细胞的分裂频率和愈伤组织形成数量上看,均较其它培养法的高。7)各种基因型原生质体的培养,除野生种福州金山割手密未形成愈伤组织外,其它4种基因型都形成了愈伤组织,以新台糖15号形成的愈伤组织质量最好。8)4种基因型愈伤组织继代和分化的效果均较差,目前为止均未再生植株。……   
[关键词]:甘蔗;胚性悬浮细胞;原生质体分离;原生质体培养;影响因素
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:福建农林大学2000年