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高度糖基化终产物影响破骨细胞骨吸收功能的研究

杨帆

  目的:通过体外骨吸收模型,观察AGE蛋白是否可以激活破骨细胞引起骨吸收,并分析其作用机制,以寻求AGE蛋白参与骨代谢导致骨质疏松症的直接证据。方法:用人血清白蛋白和葡萄糖恒温孵育制备人AGE蛋白,通过AGE自由荧光度的测定加以鉴定,观察分析AGE的形成过程;通过酶消化法从成人髂骨松质骨分离破骨细胞,通过细胞形态的观察、TRACP染色、TRACP免疫电镜、玻连蛋白受体免疫荧光测定等方法证实所分离培养的破骨细胞;在成功分离培养破骨细胞的基础上,通过酶动力学法测定培养液内酸性磷酸酶(ACP)和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)的活性、运用粘附式细胞仪动态观察破骨细胞内氢离子的变化、采用甲苯胺蓝染色和图象分析评价AGE对破骨细胞形成骨吸收陷窝的影响,观察AGE对破骨细胞骨吸收功能的作用。结果:AGE的生成与葡萄糖的浓度呈正相关,而且呈指数增加趋势;随着孵育时间的延长,AGE的形成不可逆地累积增加;采用酶消化法可以有效地分离培养破骨细胞,并可在此基础上观察AGE对破骨细胞功能的影响,发现低浓度(50~200μg/ml)AGE蛋白对细胞的ACP和TRACP活性影响不显著,高浓度(500~1000μg/ml)AGE蛋白对ACP和TRACP活性则有显著影响(P<0.01),而且ACP活性的增高主要来自TRACP活性的增高。低浓度(50μg/ml)AGE就可以引起破骨细胞内氢离子浓度的升高(p<0.05),细胞内氢离子浓度随AGE的剂量增加而升高(P<0.01)。但只有高浓度的(500~1000μg/ml)AGE蛋白才能促进骨吸收陷窝的面积扩大和数目增加(P<0.05)。结论:AGE可以引起体外培养的破骨细胞内氢离子浓度的显著升高,ACP活性和 TRACP活性增加并促进骨吸收陷窝的形成。本研究获取了在AGE 的作用下破骨细胞活性增加的直接证据,说明AGE可通过促进破骨细胞的破骨功能加速骨吸收,提示AGE有可能是老年性骨质疏松和糖尿病骨质疏松的共同发病基础。……   
[关键词]:糖基化;破骨细胞;骨吸收
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:第一军医大学2000年