手机知网 App
24小时专家级知识服务
打 开
手机知网|搜索

农杆菌介导的几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶基因转化马铃薯的方法研究

刘建荣

  本试验在国内首次用几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶基因对马铃薯进行了转化,并对以马铃薯叶盘和茎段为外植体的再生系统和根癌农杆菌介导的转化系统进行了优化研究。供试菌株LBA4404含有质粒pCGⅡ,为几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶基因的双价表达载体,两种酶可表达于细胞间隙。实验结果如下:优化的马铃薯再生系统中,愈伤组织诱导阶段的培养基为MS+NAA0.5mg/L+6-BA 2.0mg/L和MS+NAA 1.0mg/L+6-BA 2.0mg/L。分化阶段叶盘愈伤组织的培养基为MS+GA_3 5.0mg/L+6-BA 2.2mg/L和MS+GA_35.0mg/L+KT 2.0mg/L+6-BA 2.2mg/L,茎段愈伤组织为MS+GA_35.0mg/L+6-BA 2.2mg/L。愈伤组织诱导和分化过程中以加卡那霉素(Kan)100mg/L进行筛选,再生苗生根阶段以加Kan50mg/L进行筛选。优化的马铃薯转化系统中,农杆菌浓度以OD_(600)为0.5最佳,AS浓度为50μmol/L时对转化的促进作用最强。外植体适宜的预培养时间、侵染时间和共培养时间,叶盘分别为3天、15~20分钟和4天,茎段分别为2天、10~15分钟和4天。用几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶基因对马铃薯进行转化,由“韩Ⅱ”品种叶盘和茎段经诱导均获得了抗卡那霉素(Kan~R)愈伤组织,转化率分别为86.3%和81.5%,苗分化率分别为32.1%和11.1%。进行胭脂碱分析表明Kan~R转化植株有胭脂碱的合成。并初步测定Kan~R转化植株对Fusarium spp和Rizoctonia solani有一定的抗性。……   
[关键词]:马铃薯;基因转化;几丁质酶基因;β-1;3-葡聚糖酶基因;根 癌农杆菌
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:甘肃农业大学2000年