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杂合抗菌肽突变体基因mMA-E的构建及在大肠杆菌中表达

邓志雄

  MA-E是人工设计、化学合成的一杂合肽,具有理想抗菌活性,该设计保持了抗菌肽类典型结构特征:一铰链区连接两段螺旋多肽,其N端的半分子设计是参照蛙皮素N端3-14位氨基酸残基,中间的铰链为Ala-Gly-Pro,而C端的半分子则参照蜂毒素N端3-13位氨基酸残基,共同构成该杂合肽MA-E。根据MA-E的氨基酸序列设计的MA-E基因,巳在大肠杆菌中克隆和表达。mMA-E基因是利用PCR技术,在MA-E基因上引入点突变,使该杂合肽的N端蛙皮素半分子更具螺旋化,而C端的蜂毒素半分子带更多正电荷,从而优化并提高该抗菌肽的活力,突变后的基因长81bp,编码27个氨基酸残基。突变基因连接到表达载体pTYB2上,并分别转化到大肠杆菌DH5α和BR2566中,对重组质粒pTYB2~(mMA-E)进行序列测定,证实克隆的基因序列与设计的完全一致。重组子质粒转入受体菌ER2566进行蛋白质诱导表达,表达物经IMPACT-T7 One Step Protein Purification SystemKit纯化、Tricine-SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染检测,可见一段特异多肽带:内蛋白子-基丁质结合区(intein-CBD),分子量为55Kdal,与预期相符。用琼脂渗透法(Agar Diffusion Method)测定活性,结果得出纯化物具有抗菌活性。这些实验结果表明mMA-E基因在大肠菌中已成功地表达。……   
[关键词]:抗菌肽;蛙皮素;蜂毒素;MA-E杂合肽;诱导表达;内蛋白子-基丁质结合区
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:暨南大学2000年