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结球白菜离体转化体系的建立及转LMV-CP基因植株的获得

成细华

  在芸薹属栽培种中,结球白菜属于离体再生能力差的一类。通过在分化培养基中添加3mg/L的AgNO_3,显著地提高了结球白菜的不定芽分化率。研究发现结球白菜离体再生能力受基因型影响;在供试的20份结球白菜材料中,以子叶-子叶柄为外植体,17个基因型有不定芽发生能力,其中10个基因型芽分化率在80%以上。对不同外植体(子叶-子叶柄、子叶切片、下胚轴、真叶切片)的再生能力进行了比较,发现子叶-子叶柄和真叶切片具有较强的再生能力。真叶切片有希望成为某些基因型理想的转化受体。从培养基和培养条件两方面对结球白菜组培苗玻璃化的成因进行了研究。在一定范围内,降低激素浓度(BA从2-1mgL~(-1),NAA从1-0.5mgL~(-1))、提高琼脂浓度(0.8%-1.4%),不会影响芽分化率,却有利于正常芽的分化形成;而降低AgNO_3浓度、提高蔗糖浓度、添加活性炭或改用通气性好的三角瓶,对抑制玻璃芽的发生无明显作用。初步认为激素浓度和琼脂浓度是影响结球白菜玻璃化的主要原因。以再生频率高的No.80、92-2、No.3、No.10为转化材料。以子叶-子叶柄或真叶切片为外植体进行农杆菌转化实验。农杆菌菌株为C_(58),质粒载体为pV11,携LMV-CP基因及选择标记基因bar。以草丁膦(Basta,有效成分Phosphinothricin)为选择剂,以子叶-子叶柄为转化受体,从No.80、92-2两个基因型筛选到抗性植株,频率分别为2-6%和3.7%。以真叶切片为转化受体,从No.80获得抗性植株,频率为2.0%。随机选取6株抗性株,通过PCR及PCRSouthern斑点杂交检测,证明LMV-CP基因已经整合进其中3株的基因组。抗病毒检测正在进行中。……   
[关键词]:靶薹属;结球白菜;外植体;组织培养;植株再生;gNO_3;基因 型;转基因;根癌农杆菌;bar;LMV-CP
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:首都师范大学2000年