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乳铁蛋白的提取、促进铁吸收及其抑菌性质的研究

张英华

  乳铁蛋白(LF)是一种铁结合糖蛋白,分子量大约是77000±2000Da,pI=8.0±0.2。乳铁蛋白具有多种生物活性。本课题对LF的提取条件、检测方法、热稳定性、补铁功能、抑菌作用等进行了全面深入的研究。1.建立三种LF的免疫学检测方法---酶联免疫法、单相免疫扩散法、双相免疫扩散法。其中酶联免疫法精确度高,最小检出量为0.5mg/L,线性范围为0.8~100mg/L。单相免疫扩散法是一种操作较为简便的定量检测方法,适用于在提取过程中测定LF的浓度。双相免疫扩散法是一种特异性强,操作较为简单的定性检测方法,通过抗原和抗体形成的沉淀线来判断乳铁蛋白的存在。2.本实验用色谱法提取乳铁蛋白,柱材料为CM Sephadex C-50,在pH值为7.4时,用含有NaCl的磷酸盐缓冲液进行线性梯度洗脱。3.为了建立一种针对乳铁蛋白的有效的杀菌方法,研究了乳铁蛋白在不同pH值下,经热处理后其免疫活性和抑菌效果的变化。将乳铁蛋白的pH值分别调至3.7~8.0,在65~135℃几个不同的温度下进行热处理后,用免疫双扩散法检测其免疫活性,以及对大肠杆菌的抑菌效果。结果表明,pH4.8、75℃加热5min,不仅保持LF的溶解性和免疫活性,而且能大大提高其抑菌效果。4.乳铁蛋白可以通过增加肠道内无机铁的溶解度来促进铁的吸收,本实验测定在磷酸根存在的中性pH值条件下,乳铁蛋白对Fe~(3+)和Fe~(2+)溶解度的影响,结果表明LF对Fe~(3+)和Fe~(2+)均有增溶作用。5.抑菌实验选择大肠杆菌和沙门氏菌两种肠道致病菌。随着乳铁蛋白浓度的增加,对两种菌的抑菌效果均明显增强。pH值对乳铁蛋白的抑菌作用也有影响,对大肠杆菌的最佳抑菌pH值为7.4,对沙门氏菌的最佳抑菌pH值为7.0。另外乳铁蛋白与免疫球蛋白和溶菌酶具有协同的抑菌作用。……   
[关键词]:乳铁蛋白;提取;酶联免疫;热稳定性;铁吸收;抑菌作用
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:东北农业大学2000年