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中华绒螯蟹肠道动力相关神经元的初步研究以及温度对肠道动力和胃肠排空的影响

黄坚

  中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)隶属于节肢动物门(Crustacea)、十足目(Decapoda)、方蟹科(Grapsidae),俗称―大闸蟹‖或―河蟹‖,是一种我国淡水系养殖的健康特种经济蟹类,因其肉质细腻、鲜美并具有很高的营养和药用价值,而成为近年来非常流行的健康美食和高档礼品。近年来随着市场需求的提高,其人工养殖的比重以及产量日益增加,中华绒螯蟹的年产量也由1993年的1075吨,增加到2014年的75万吨[1],王武、成永旭等学者们在中华绒鳌蟹人工养殖、投喂模式以及育种繁殖等方面进行了大量的研究[1],而中华绒螯蟹胃、肠动力相关的基础研究还比较匮乏,本研究就中华绒螯蟹肠道动力相关神经元以及肠道动力和食物排空为主要内容进行初步探究。本研究首次采用了消化道全层铺片技术(whole mount stretch preparation)对中华绒鳌蟹肠壁各层进行了分离铺片,对分离出的黏膜层(单层柱状上皮和基膜)、黏膜下层、肌层进行了H.E染色的组织学形态比较,应用乙酰胆碱酯酶(AchE)、NADPH-黄递酶以及锇酸碘化锌组织化学染色的方法分别对肠壁AchE、NOS、Cajal间质细胞形态以及分布进行了初步研究,并对中肠和后肠Ach、NO含量以及Na+,K+-ATP酶活性进行了测定。同时研究分析了不同温度对中华绒螯蟹肠道食物推进速度以及食物排空时间的影响以及不同投喂模式对中华绒螯蟹幼蟹摄食节律的影响。1.中华绒螯蟹成蟹中、后肠道铺片的H.E染色的组织学比较对中华绒螯蟹中肠和后肠分别进行分层铺片,获得了肌层、黏膜下层、黏膜层(单层柱状上皮和基膜)三层铺片,常规H.E染色。实验结果表明:中肠和后肠肌层均为平滑肌,中肠肌肉层较后肠薄,肌肉肌纤维较细,肌丝间隔明显,后肠肌肉肌纤维较粗排列紧密,肌丝间隔较小;中肠和后肠黏膜下层均密集分布着大量细胞,细胞多为圆形或卵圆形,大小2-10μm,后肠黏膜下层较中肠厚,细胞分布更为密集;中肠和后肠基膜内均未见明显细胞结构,类似膜状,中肠基膜较后肠薄。2.中华绒鳌蟹中肠和后肠中AchE、NOS、Cajal间质细胞的观察以及Ach、NO含量和Na+,K+-ATP活性的分析应用乙酰胆碱酯酶(AchE)和NADPH-黄递酶和锇酸碘化锌组织化学染色方法分别观察肠道中AchE和NOS阳性神经元和Cajal间质细胞的分布和形态,并对中肠和后肠Ach、NO含量以及Na+,K+-ATP酶活性进行测定。研究表明:AchE、NOS和Cajal间质细胞均广泛分布于中肠和后肠的黏膜下层,在肌肉层和基膜层均未见明显阳性着色。AchE阳性神经元胞体清晰,胞核不着色,无明显胞突,大小3-10μm不等,形态多样,中肠阳性神经元多为圆形、卵圆形或梭形,后肠阳性神经元呈圆形或者椭圆形;NADPH-d阳性反应产物为蓝色沉淀,胞核不着色,阳性胞体的大小不等,呈不同形态,部分细胞有胞突伸向临近细胞,ICC间质细胞胞体多为卵圆形,形态相似,大小3-5μm,细胞着色深浅不一,后肠较中肠着色更加明显;ICC间质细胞在呈片状密集均匀分布,形成大小不一的细胞团,各细胞团之间有细胞衔接。AchE、NOS阳性神经元和Cajal间质细胞在中肠和后肠黏膜下层的分布有明显差异,中肠AchE阳性神经元呈片状分布,疏密不一,着色深浅不等呈强阳性或弱阳性,而后肠黏膜下层绝大多数神经元着色较深,分布均匀且密集;后肠中NOS在后肠中分布呈块状,分布密集,呈现强阳性,染色较深,而中肠阳性神经元多呈条状或点状分散分布,整体形成网络结构;后肠中ICC间质细胞在分布呈块状,分布密集,呈现强阳性,染色较深,而中肠阳性神经元多呈条状或点状分散分布,整体形成网络结构,而且后肠间质细胞分布更为密集。中肠中Ach和NO的含量均显著低于后肠(P<0.05),而Na+,K+-ATP活性在中肠显著高于后肠(P<0.05)。3.摄食节律和温度对中华绒螯蟹肠道食物推进速度以及食物排空时间的影响本实验研究了河蟹两种投喂频率(一次性和分段性投喂模式),研究了人工饲料下中华绒螯蟹幼蟹的摄食节律,并设定了4个温度实验组,通过各时间点食物推进数据记录来进行不同温度食物推进速度和食物排空时间的研究。实验结果:中华绒螯蟹在18:00-21:00出现一次较高的摄食高峰,在6:00-9:00可能会出现较低的摄食高峰;雄蟹在胃中停滞时间较雌蟹长,食物在雌蟹胃肠道中推进时间较短,停止投喂后雌蟹在7h时80%已经同步排空,雄蟹在则需要6.5h。16℃—25℃,食物排空速度相应的升高,胃肠排空时间相应减少,然而30℃胃肠排空时间却有所增加,20℃和25℃肠道食物推进和食物排空时间均较快,16℃和30℃组肠道食物推进食物推进显著低于20℃和25℃组(P<0.05),20℃和25℃组差异不显著;雌蟹幼蟹肠道肠道推进速度普遍高于雄蟹幼蟹,实验结果表明20—25℃是中华绒螯蟹肠道排空速度最快温度。……   
[关键词]:中华绒螯蟹;肠道动力;胃肠排空;神经元
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:上海海洋大学2016年