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蛋鸡饲养全程中大肠埃希菌和沙门菌耐药基因检测及PFGE分型研究

唐攀

  大肠埃希菌和沙门菌作为重要的细菌性病原给养殖业带来极大损失,鸡大肠埃希菌感染主要表现为心包炎、肝周炎、输卵管炎和卵黄性腹膜炎等,鸡沙门菌感染则主要以肠炎和败血症为主,且沙门菌可通过污染鸡蛋而引起人的感染,因此,开展鸡源大肠埃希菌和沙门菌的监测研究具有重要的经济和公共卫生学意义。本研究以铜川某规模化养殖场的蛋鸡群为研究对象,对育雏期、育成期和产蛋期整个饲养全程进行连续跟踪,对期间分离保存的120株鸡源大肠埃希菌和42株鸡源沙门菌进行耐药性分析、耐药基因的检测以及PFGE分型的研究,以探索蛋鸡饲养全程中大肠埃希菌、沙门菌耐药性及耐药基因变化规律,为临床筛选安全敏感抗生素,初步建立细菌菌种库及细菌耐药性流行病学调查数据库提供参考。 1.参照CLSI(clinical and laboratory standards institute)推荐的K-B药敏纸片法对饲养全程中不同阶段分离的120株鸡源大肠埃希菌和42株鸡源沙门菌分离株进行18种常用抗生素敏感性试验。结果显示,育雏期、育成期相对于产蛋期其耐药性没有明显变化,所有鸡源大肠埃希菌对氨苄青霉素、链霉素、四环素和萘啶酸普遍耐药,耐药率均在90%以上;对阿莫西林、庆大霉素耐药性呈先升后降趋势,且耐药性在产蛋高峰期达到最高;对复方新诺明、妥布霉素和新霉素的耐药率在整个饲养全程中呈缓慢上升趋势,对头孢他啶和强力霉素的耐药率呈缓慢下降趋势。鸡源沙门菌对氨苄青霉素、四环素、萘啶酸、诺氟沙星和氧氟沙星耐药率均在60%以上;对大观霉素和氧氟沙星的耐药性在整个饲养全程中呈现上升趋势,而对强力霉素耐药性则呈下降趋势;多重耐药严重,多重耐药率达100%。 2.采用PCR方法,对120株鸡源大肠埃希菌和42株鸡源沙门菌进行质粒介导的耐药基因的检测。结果显示,从鸡源大肠埃希菌分离株中检出8种耐药基因,其中tetA、tetB、blaTEM、blaCTX-M、aac(3)-II和sul-I耐药基因的检出率与E.coli分离株的耐药性呈显著相关性(P<0.05);从鸡源沙门菌分离株中检出6种耐药基因,其中tetA、blaCMY-2、 blaTEM-1和sul-II的检出率与沙门菌分离株的耐药性呈显著相关性(P<0.05)。 3.采用凝胶脉冲场电泳方法,对120株鸡源大肠埃希菌和42株鸡源沙门菌分离株进行PFGE分型研究,并分析菌株同源性。聚类分析结果显示,鸡源大肠埃希菌分离株PFGE带型复杂,说明该鸡场流行的大肠埃希菌基因型较多;但菌株同源性为75%~100%,推断可能由某种或某几种相似菌株的垂直或水平传播引起的;鸡沙门菌分离株可分为7个PFGE带型,其中以第4种PFGE带型为优势带型,前6种带型(41株沙门菌)菌株间同源性均在80%以上,表明该鸡场沙门菌的流行可能是由少数几种菌株传播引起的;相同血清型菌株的PFGE型并不一定相同,不同血清型的菌株PFGE分型结果可能相同;同源性较高甚至相同的菌株耐药性并不一定相同。……   
[关键词]:蛋鸡;大肠埃希菌;沙门菌;耐药基因;PFGE
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:西北农林科技大学2013年