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青蒿RTNs的研究和虎杖叶的解剖结构研究

何忠宝

  1青蒿的RTNs研究 1.1从青蒿的EST数据库中挖掘RTNs序列 青蒿为菊科植物黄花蒿(Artemisia annua L.)的干燥地上部分,其主要药用成分青蒿素为抗疟要药。由于其重要的药用价值,青蒿成为药用植物中基因数据最为丰富的物种,截止2010年4月,在GenBank中,EST序列有9万4千余个。从EST数据库中挖掘RTNs序列,对研究青蒿不同组织中的同源基因,认识其复杂的生理和病理过程,分析种内遗传变异以及物种进化关系具有重要的作用。本研究利用CAP3聚类及Bioperl辅助分析,对青蒿的EST数据集进行挖掘,筛选出确认为RTNs的青蒿EST contig22个选择其中长度大于900bp的contig1个,设计1对PCR引物,通过常规的PCR验证,得到与预期序列长度一致的青蒿反转录转座子的核苷酸序列,说明预测的序列存在于青蒿基因组中,该数据挖掘方案切实可行,为青蒿RTNS的数据挖掘提供了新的思路。 1.2青蒿iPBS的条件优化 iPBS (inter-Primer binding site)是2010年出现的一种新的分子标记方法,运用iPBS技术可以在没有已知序列信息的条件下进行,具有适应性强,操作简单,分辨率高等优点。iPBS标记是基于PCR的标记,其反应条件易受各种因素的干扰,为确保iPBS分析结果的可靠性和重复性,本文通过对PCR反应体系中的模板DNA、Taq DNA聚合酶、dNTP以及Mg2+浓度等最佳反应条件进行探索,建立了适用于青蒿的优化的iPBS-PCR的反应体系。该分子标记体系的建立为iPBS标记在青蒿分子标记辅助育种、遗传多样性、种质资源鉴定等领域提供研究基础。 2虎杖叶的解剖结构研究 虎杖叶具有平肝潜阳、祛痰息风的功效;性苦,微涩,微寒,归肝经。但虎杖叶并没有作为常规中医用药来发挥其疗效,为了节约药用植物资源,本研究对虎杖叶的解剖结构进行研究,为开发出虎杖植株新的药用部位提供部分依据。本研究运用生物显微技术,对虎杖叶进行石蜡切片,通过徒手撕片及粉末制片,其结果为:虎杖的上表皮细胞排列规则,近等径,虎杖的下表皮细胞排列不及上表皮整齐,气孔仅分布在下表皮,气孔类型为不定式。横切面观,虎杖叶的上下表皮均由一层细胞组成,上表皮细胞较大,近长方形,厚度为66.3μm,下表皮细胞较小,近方形,其厚度为38μmm。叶肉中,栅栏组织紧接表皮下方,排成一层,而海绵组织为于栅栏组织与下表皮之间,是典型的两面叶,栅栏组织细胞呈圆柱形,排列整齐紧密,其中最长的达到95μm,宽为28.5μm,最短的达到85μm,宽为25μm,栅表比为1比2,海绵组织与下表皮相接,由一些近圆形,或不规则的薄壁细胞构成,细胞间隙较大,排列疏松,而且薄壁细胞中有簇晶。虎杖叶为网状脉,向下突起,主脉由维管束和基本组织组成,其中维管束为环状维管束,由木质部,形成层,和韧皮部组成,木质部在内,韧皮部在外。其维管束的直径为218.5μm。木质部发达,有纤维,导管较多,形成层不明显,韧皮部的细胞排列紧密。……   
[关键词]:青蒿;EST;RTNs;iPBS;虎杖叶;解剖结构
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:成都中医药大学2012年