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抗犬瘟热和犬细小病毒病二联卵黄抗体的制备及其临床治疗效果观察

肖飞

  犬瘟热病毒(Canine distemper virus, CDV)和犬细小病毒(Canine parvovirus virus, CPV)均能引起犬的高度接触性、致死性传染病,是世界各地常见的犬只病毒性疾病。犬瘟热常表现为双相体温升高、急性鼻卡他和随后的支气管炎、卡他性肺炎、严重胃肠炎和神经症状;犬细小病毒病常表现为肠炎综合征,少数呈现心肌炎综合征。临床上常用特异性的高免血清和单克隆抗体对犬瘟热和犬细小病毒病进行防治,卵黄抗体较高免血清和单克隆抗体有生产成本低、操作简便、可大量生产等优点。目前有应用卵黄抗体治疗犬的报道,然而临床上应用的卵黄抗体滴度较低,治疗效果不太理想。本试验试图通过制备组织灭活苗免疫蛋鸡,以提高卵黄抗体滴度,并进行临床治疗效果观察,为以后卵黄抗体在犬病的治疗上提供科学依据。 试验1首先将本实验室保存的CDV、CPV毒株作为毒种,分别接种于非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)、猫肾细胞(F81细胞),进行病毒的培养扩增,当80%以上细胞产生细胞病变效应(Cytopathic effect, CPE)后收集细胞及培养液;然后用所培养病毒对健康犬进行攻毒,使其出现临床症状并死亡后,取犬的内脏进行匀浆、离心,最后按常规的甲醛法灭活组织匀浆液,以蜂胶为免疫佐剂,制备CDV/CPV二联组织灭活苗。 试验2将本试验制备的犬瘟热和犬细小病毒二联组织灭活苗和二联细胞毒灭活苗给正处于产蛋期的40周龄蛋鸡分别进行免疫,然后对两种方法所收集的鸡蛋中的抗体进行效价的测定和对比,确定比较好的蛋鸡免疫方法。试验分为3组,每组10只蛋鸡。A组:注射的疫苗为组织灭活苗;免疫方法为颈部、胸部、翼部和腿部多位点肌肉注射;免疫时间:第1d、第8d、第22d、第30d。B组:免疫方法和免疫时间均和A组一致,不同的是注射的疫苗为细胞毒灭活苗。C组为对照组,注射生理盐水,免疫方法和免疫时间均和A组一致。在第四次免疫后,每隔两天收集鸡蛋,直到第50d。利用PEG6000二步沉淀法从收集的鸡蛋中分离和提取卵黄抗体(IgY),然后采用体外病毒中和试验和间接Elisa方法测定卵黄抗体的效价。试验结果显示:A组所得抗体的效价明显高于B组,并且A组抗体达到峰值的所需时间较B组短;试验证明采用组织灭活苗制备卵黄抗体的方法比传统的制备卵黄抗体的方法好。试验3首先把卵黄抗体做成口服胶囊型制剂;然后选取临床上自然感染犬瘟热的发病犬20条和自然感染犬细小病毒病的犬20条;把患有犬瘟热的犬和患有犬细小病毒病的犬分别分成两组:试验组和对照组,每组10条犬;对照组按照常规的治疗方法进行治疗,试验组按照常规治疗方法进行治疗的同时饲喂卵黄抗体胶囊;最后测定两组犬的治愈率和治愈时间。试验结果显示:试验组患病犬的治愈率比对照组高,试验组治愈时间比对照组治愈时间短;由此可以说明,本试验研制的卵黄抗体胶囊对犬瘟热、犬细小病毒病有确切疗效。……   
[关键词]:犬瘟热病毒;犬细小病毒;组织灭活苗;卵黄抗体
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:南京农业大学2010年