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进口加拿大油菜籽真菌与转基因品系检测技术研究

陈明爱

  油菜是世界上最主要的油料作物之一,在世界农产品贸易发展中占有重要地位。我国是世界油菜籽十大生产国和消费国之一,虽然我国油菜种植面积逐渐扩大,但是由于油菜籽生产规模小、产品质量不高、生产加工技术落后等因素,已远远满足不了人们对油脂产品的强劲需求。因此需要从国外进口大量油菜籽以平衡国内油脂产品供不应求的矛盾。据海关统计数据显示,2011年,中国进口油菜籽总量约为126.23万吨,来自加拿大、蒙古等国,其中进口于加拿大的油菜籽占进口总额的99%以上,全部为转基因油菜籽。大量进口的油菜籽不可避免地会对我国农业发展、作物安全和生态环境等方面造成损害。一方面表现为各种有害生物,尤其是极易种传的有害病原生物随进口油菜籽进入我国的可能性加大。另一方面,转基囚油菜籽的大量进口,使基因扩散、基因叠加和基因污染等生物安全问题成为我国环境保护、生态平衡、食品安全等研究领域中不容忽视的隐患。因此,在进口加拿大油菜籽检疫工作中,进行有害病原生物和转基因成分检测是有效防范有害病原生物传入、落实转基因油菜安全管理措施、保障我国油菜产业安全发展的重要举措。 本文从植物检疫的角度出发,统计分析世界油菜病原真菌种类,在比较中国与加拿大油菜病原真菌种类基础上,以进口加拿大8批油菜籽为研究对象,采用琼脂平板法分离菌株,以形态学和分子生物学相结合的方法,对分离出来的每株真菌进行鉴定并进行种群多样性分析。结果显示:进口加拿大油菜籽上真菌种类复杂,分离的602个菌株共鉴定为22种,其中油菜致病菌9种,包括1种我国禁止进境的检疫性有害真菌,即油菜茎基溃疡病菌(Leptosphaeria maculans)。分离数量最多的是互隔交链孢菌(Alternaria alternata)、黑曲霉(Aspergillus niger)和Lewia infectoria,分别占菌株总数的23.4%、15.8%、14.0%。通过研究,本文提出要进一步加强对进口加拿大油菜籽的检疫,防止检疫性有害生物以及我国尚未报道的病原真菌入侵,保障我国油菜籽安全生产。 本文还建立了一种应用多重核酸扩增(多重PCR)检测油菜中特异的内源PEP基因和转基因油菜品系MS1、RF1、RF2、RF3、RT73的快速方法。以油菜内源PEP基因和5个转基因油菜品系为检测对象,设计多重PCR特异性检测引物,优化PCR体系,进行灵敏度检测,并以玉米、棉花等32个转基因和非转基因参考DNA模板做特异性检测。结果显示,所建立的多重PCR方法能同步检测到油菜内源PEP基因和转基因油菜品系MS1、RFl、RF2、RF3、RT73的特异性扩增条带,而未检测到其他参考模板,检测灵敏度为1ng/μL。表明本研究建立的多重PCR检测方法具有很好的特异性,可以快速、准确、高通量地检测上述标靶基因,是转基因油菜及其产品快速检测的有效技术。 上述研究结果对我国进口油菜籽及其产品开展有害生物和转基因成分检测和监管,预防外来有害生物入侵,保障我国油菜籽安全生产均有重要价值。……   
[关键词]:油菜籽;病原真菌;转基因;多重PCR;检测
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:昆明理工大学2012年