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骨肽注射液药效学研究及生物活性检测方法的建立

刘少丽

  目的:研究骨肽注射液对原发性骨质疏松病证的治疗作用及对体外成骨细胞的促增殖作用,建立骨肽注射液生物活性检测方法。 方法:60只健康雌性SD大鼠切除双侧卵巢30天后随机分为正常对照组、模型组、阳性药尼尔雌醇组、骨肽注射液高、中、低剂量组每组各10只,正常对照组、模型组注射等量生理盐水,各组均连续给药12周,观察骨肽注射液对原发性骨质疏松病证的治疗作用;体外培养Wistar乳鼠颅盖骨成骨细胞,MTT法检测骨肽注射液对成骨细胞促增殖作用。采用Wistar乳鼠颅盖骨成骨细胞原代培养和成骨样细胞株MG-63(人骨肉瘤细胞)培养的方法,通过MTT法检测,建立骨肽注射液生物活性检测方法。 结果: 1骨肽注射液能提高去卵巢骨质疏松模型大鼠腰椎、股骨的骨密度,降低血碱性磷酸酶代偿性升高,对骨质疏松模型大鼠骨去脂干重、灰重、骨钙、骨磷降低具有明显改善作用,对血清雌二醇含量降低及子宫指数的降低有一定改善但无统计学意义;HE染色光镜下观察可见骨小梁数目增多、连接性好,排列形态与正常组接近,骨髓腔明显缩小,骨髓组织与骨小梁面积比也明显缩小,骨小梁表面成骨细胞数目逐渐增多,排列较紧密,电子显微镜下可见骨小梁结构较为完整;高倍镜下可见覆盖骨小梁表面的胶原纤维丝粗细较模型组均匀,纤维丝之间走向排列规则、整齐而且紧密靠近,可见斜行的胶原纤丝较整齐、断裂较少,胶原纤维排列趋于正常;成功地分离、纯化并培养了Wistar乳鼠颅骨成骨细胞,并鉴定为成骨细胞,MTT检测后表明骨肽注射液对该细胞有明显的促增殖作用。 2采用稳定的人成骨样细胞株MG-63(人骨肉瘤细胞)进行生物活性检测,确定5×104的细胞密度,0.1mg/ml的给药剂量,培养72h为最佳培养时间,结果表明骨肽注射液具有明显的促成骨细胞增殖作用并建立了骨肽注射液生物活性检测方法。 结论:骨肽注射液有抗骨质疏松的作用,且疗效显著;对成骨细胞有明显的促增殖作用。所制备的骨肽注射液符合注射剂的要求,并建立了稳定的生物活性检测方法。……   
[关键词]:骨肽注射液;原发性骨质疏松;成骨细胞
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:长春中医药大学2012年