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氯霉素侧流层析免疫检测技术研究

孔令文

  氯霉素(Chloramphenicol,CAP)是一种广谱抗生素,因其效高价廉,曾被广泛用于养殖业。由于氯霉素具有严重的毒副作用,其在动物性食品中的残留严重威胁着人类的健康,因此,发达国家早已禁止或严格限量氯霉素(CAP)应用于食品动物,并对食品中CAP的最高残留量制定严格的标准。但是传统氯霉素残留分析检测方法需要昂贵的仪器设备和专业的技术人员,而且分析周期长,成本太高,不能实现现场快速检测。因此,建立一种经济、灵敏、高效的CAP残留分析方法是非常必要的。侧流层析免疫检测方法(即胶体金免疫层析试纸条检测法)是利用抗原与抗体的特异性结合反应对少量抗原或抗体测定的方法,本文在总结抗氯霉素多克隆抗体纯化分离方法的基础上研制氯霉素免疫胶体金层析试纸条,具有十分重要的现实意义和商业开发价值。 为获得应用于研制胶体金试纸条的抗氯霉素抗体,本实验采用重氮化法合成CAP-OVA,CAP-BSA,并经紫外分光光度法、红外光谱法、聚丙烯酰胺电泳法等鉴定了两种抗原偶联成功。以CAP-OVA为免疫原多次免疫Balb/C小白鼠,采集抗血清,制备出抗氯霉素多克隆抗体,运用亲和层析法进行纯化多抗。运用酶联免疫吸附分析方法证实该抗血清效价高达1:32000,且与链霉素、四环素、土霉素、青霉素等类似物的交叉反应率均小于0.01%,具有较高的特异性亲和力。 在侧流层析免疫层析法中,将兔抗鼠抗体和包被抗原包被在硝酸纤维素膜AE99上,分别作为质控线和检测线,组装试纸条。根据颜色深浅判断结果,实验结果表明试纸条的检测限为1μg/ml,与氯霉素结构类似物没有明显的交叉反应。……   
[关键词]:氯霉素残留;快速检测;人工抗原;多克隆抗体;胶体金
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:浙江海洋学院2012年