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NDV HN蛋白重组乳酸菌的免疫学研究

孙景秀

  新城疫病毒(Neweastle disease virus,NDV)通过消化道和呼吸道黏膜引起禽类以呼吸困难、神经机能紊乱、黏膜和浆膜出血为主要特征的急性传染病。新城疫是全球范围内最严重的家禽传染病之一,对养禽业威胁极大,造成了严重的经济损失。 本研究对本实验室已构建的重组pLA-HN/L.case进行了鉴定,将重组pLA-HN/L.casi在MRS培养基中培养表达后,经SDS-PAGE分析,约有99KDa的目的蛋白得到表达,蛋白大小与理论值相符合。利用间接免疫荧光试验和流式细胞术的结果表明,融合蛋白已展示在菌体表面。 将空质粒pLA/L.casei、重组pLA-HN/L.casei、免疫增强剂加重组pLA-HN/L.casei、LaSota弱毒苗分别口服及滴鼻、点眼免疫雏鸡,免疫后不同时间采集血液样品,利用间接ELISA方法检测雏鸡产生抗NDV的特异性IgG抗体消长规律;收集泪液、胆汁、气管及肠道冲洗液样品,测定雏鸡产生抗NDV特异性sIgA抗体水平的动态规律。同时于末免后2周,采集雏鸡的脾脏,测定免疫雏鸡脾淋巴细胞增殖情况,并对免疫雏鸡进行攻毒保护性试验。结果表明重组菌口服及滴鼻、点眼免疫雏鸡后均能够产生明显的特异性抗体水平,不仅能检测到高水平的血清IgG抗体,还能在泪液、胆汁、气管及肠道冲洗液样品检测到sIgA抗体,并且LaSota弱毒苗产生的抗体效果大于免疫增强剂和重组菌pLA-HN/L.casei大于重组菌pLA-HN/L.casei,均与对照组差异显著。末免后3周进行新城疫强毒攻毒,口服或滴鼻、点眼免疫LaSota弱毒苗的保护率均为100%,使用免疫增强剂的口服免疫组和滴鼻、点眼免疫组(pLA-HN/L.casei)的保护率分别为91%和100%,口服或滴鼻、点眼免疫重组菌pLA-HN/L.casei的保护率分别为82%和91%,对照组全部死亡。因此,重组菌pLA-HN/L.casei免疫可以获得局部黏膜免疫和全身免疫反应,产生良好的免疫保护力,此重组菌可以作为新城疫疫苗的候选菌株。……   
[关键词]:干酪乳杆菌;NDVHN;黏膜免疫;保护率
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:黑龙江八一农垦大学2012年