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山茶蜂花粉多糖的分离纯化和免疫活性研究

刘恩绪

  山茶(Camellia japonica)属于山茶科山茶属植物,根和花可入药。山茶蜂花粉是一种营养丰富的物质,具有很好的保健作用。目前,山茶蜂花粉多糖的研究主要集中在活性上,对山茶蜂花粉多糖分离纯化上的研究尚未见报道。本论文主要研究了山茶蜂花粉多糖的分离纯化及免疫活性。 山茶蜂花粉经过热水煮提,过滤,浓缩,乙醇沉淀,获得山茶蜂花粉总多糖(WCPP),经分析得到山茶蜂花粉多糖的单糖组成为:2.5% Man、7.8% Rha、3.0% GlcA、37.0% GalA、12.5% Glc、15.1% Gal和22.1% Ara,并通过凝胶柱对其进行检测,发现分子量分布不均一。 本论文采用两种方法对WCPP进行分级: 第一,采用乙醇沉淀的方法对WCPP进行分级,分别用30%、50%、70%和80%乙醇对WCPP进行沉淀,获得四个级份WCPP-30、WCPP-50、WCPP-70和WCPP-80。单糖组成分析表明:WCPP-30含有4.3% Man、7.4% Rha、45.4% GalA、10.6% Glc、10.3% Gal、2.1% Xyl和20.2% Ara;WCPP-50含有2.0% Man、9.1% Rha、42.7% GalA、8.8% Glc、11.5% Gal、2.0% Xyl和23.9% Ara;WCPP-70含有2.1% Man、8.7% Rha、1.9% GlcA、15.5% GalA、16.3% Glc、20.6% Gal、1.5% Xyl和33.5% Ara;WCPP-80含有6.3% Man,4.7% Rha、4.8% GalA、42.6% Glc、12.2% Gal和29.4% Ara。采用凝胶柱层析方法对四个级份进行了均一性鉴定,发现其分子量分布范围较宽,不易根据分子量进一步分级。 第二,采用离子交换柱层析方法对WCPP进行分级,分别用水、0.1 mol/l NaCl、0.3 mol/l NaCl和0.5 mol/l NaCl进行洗脱,获得四个级份:WCPP-N、WCPP-1、WCPP-2和WCPP-3。对四个级份进行单糖组成分析得到:WCPP-N含有4.1% Man、1.0% Rha、69.0% Glc、13.4% Gal和12.7% Ara;WCPP-1含有5.4% Man、4.3% Rha、2.5% GlcA、45.0% GalA、22.7% Gal、18.0% Ara和2.0% Glc;WCPP-2含有1.0% Man、9.5% Rha、1.9% GlcA、30.2% GalA、1.9% Glc、19.3% Gal和36.5% Ara;WCPP-3含有2.1% Man、18.8% Rha、1.1% GlcA、33.2% GalA、17.9% Glc、19.1% Gal和23.9% Ara。凝胶柱层析检测发现四个级份分子量分布比较广泛。WCPP-1和WCPP-3含量比较低,未对其进行分离纯化,主要对WCPP-N和WCPP-2进行了进一步纯化。 采用Sephadex G-100凝胶柱层析方法对WCPP-N进行分离纯化,获得WCPP-N-Ⅰ和WCPP-N-Ⅱ两个级份。经检测发现,WCPP-N-Ⅱ的分子量均一性比WCPP-N-Ⅰ好,因此对WCPP-N-Ⅱ进行了结构分析,核磁结果显示,这个级分的主链由α-1,4-Glucan,侧链由α-1,6-Glucan构成,具有支链淀粉样结构。 采用Sepharose Cl-6B凝胶柱层析方法对WCPP-2进行纯化,得到WCPP-2-Ⅰ、WCPP-2-Ⅱ、WCPP-2-ⅡⅠ、WCPP-2-ⅠV和WCPP-2-V。经检测发现,WCPP-2-Ⅰ比较均一,其他四个级份不均一。因此对WCPP-2-Ⅰ进行了结构分析,核磁结果显示,WCPP-2-Ⅰ可能含有α-1,2-Rha或α-1,2,4-Rha与α-1,4-GalA交替形成的主链,Rha的4位带有侧链分支,侧链主要为α-1,5-Ara形成的阿拉伯聚糖,还有少量β-1,4-Gal形成的半乳聚糖。 通过体内和体外巨噬细胞吞噬实验可知,山茶蜂花粉WCPP-3级份可以促进机体的巨噬细胞吞噬,但是这种促进作用并不是直接作用在细胞上,可能通过作用于其他细胞,产生相应的细胞因子,最终促进了巨噬细胞的吞噬功能。……   
[关键词]:蜂花粉;多糖;分级;免疫活性
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:东北师范大学2011年