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壳聚糖—白念菌热休克蛋白90核酸疫苗纳米粒子的制备及其缓释作用初探

关丽影

  壳聚糖(CS)是多糖中唯一天然碱性阳离子多聚糖。近年来,因其生物可降解性、生物粘附性、良好的生物相容性,以及较低的细胞毒性而得到广泛应用;壳聚糖在弱酸性溶液中氨基发生质子化,可以与表面带有负电荷的核酸通过静电作用形成纳米级粒子。提高核酸利用度,保护核酸不被酶降解等众多特性,使其作为优良的核酸载体受到广泛关注。 本文使用复凝法将壳聚糖与白色念珠菌热休克蛋白90重组质粒(DNA_(ch90))形成纳米粒子,并对其在动物实验中的缓释作用进行初步探讨。 1、多种因素对纳米粒子大小及电位产生影响实验结果表明N/P比值、DNA_(ch90)浓度、pH值、Na_2SO_4浓度、水浴温度与纳米粒子粒径大小呈正相关;N/P比值和DNA_(ch90)浓度与纳米粒子表面电位呈正相关;pH值、Na_2SO_4浓度和水浴温度与颗粒表面电位呈负相关。以此优化条件制备CS-DNA_(ch90)纳米粒子。 2、初步探究CS-DNA_(ch90)纳米粒子的理化性质和相关特性 测定纳米粒子的形态、粒径大小和分布、表面电位。结果显示制备的纳米粒子大小均一,直径在166nm左右;分散度良好;表面电位也为正值。 测量纳米粒子的包封率和载药量。结果显示其包封率高于90%,载药量大于30%;考量了CS浓度对包封率的影响。CS浓度与包封率正相关。凝胶阻滞分析实验说明粒子表面带有正电荷,壳聚糖将DNA_(ch90)包裹在颗粒中心;酶保护实验进一步证明,CS-DNA_(ch90)纳米粒抵御DNA_(ch90)被酶解。 3、CS-DNA ch90纳米粒子在动物体内对核酸疫苗的缓释作用 以CS-DNA_(ch90)纳米粒子为实验材料,采用皮下两点注射的方式免疫ICR小鼠,免疫两次,间隔时间为两周。免疫小鼠抗血清与R-Hsp90蛋白Western Blot结果表明,CS-DNA_(ch90)纳米粒子能够使免疫小鼠产生抗R-Hsp90特异性抗体。ELISA检测免疫小鼠抗血清抗R-Hsp90特异性抗体IgG、IgG1及IgG2b含量,CS-DNA_(ch90)纳米粒子组的抗体含量远远低于DNA ch90组小鼠抗体含量(P<0.01),该结果表明CS-DNA_(ch90)纳米粒子在动物体内对核酸疫苗起到了明显的缓释作用。……   
[关键词]:核酸疫苗;壳聚糖;纳米粒子;免疫应答
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:东北师范大学2011年