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重组抗原pGEX-BSjGCP-BSj23诊断家畜日本血吸虫病研究

陈实

  日本血吸虫病流行于我国南方十二省(直辖市、自治区),给人类和动物的健康造成严重威胁。准确的诊断是做好血防工作的前提;而现有的日本血吸虫病诊断方法不能满足诊断需要,因此寻求一种更为敏感、特异,并且具有疗效考核价值的诊断方法是当前的迫切需要。 本文摸索确定了重组表达菌pGEX-BSjGCP-BSj23/BL21和pGEX-LHD-Sj23/BL21的最佳表达条件;比较了尿素变性-透析复性法与Protein Refolding Kit两种包涵体蛋白纯化方法,优化了重组抗原pGEX-BSjGCP-BSj23包涵体蛋白的纯化技术;通过方阵试验,优化了ELISA实验条件;以重组抗原pGEX-BSjGCP-BSj23(BSjGCP为日本血吸虫抱雌沟蛋白相关表位,BSj23为日本血吸虫23kD表膜蛋白相关表位)和pGEX-LHD-Sj23(日本血吸虫23kD表膜蛋白的大亲水区片段)以及日本血吸虫可溶性虫卵抗原SjSEA作为诊断抗原,分别检测了70份健康水牛血清和104份感染日本血吸虫病水牛血清,比较三种抗原获得的敏感性和特异性;应用pGEX-BSjGCP-BSj23-ELISA法检测不同感染强度水牛血清,评价该重组抗原的诊断价值;以重组抗原pGEX-BSjGCP-BSj23和pGEX-LHD-Sj23以及可溶性虫卵抗原SjSEA作为诊断抗原,平行检测了实验兔感染日本血吸虫前,感染日本血吸虫后2周、4周、6周以及用血吸虫病治疗药物吡喹酮治疗后每月兔血清中三种抗原特异性抗体水平,分析兔血清中三种特异性抗体的消长变化,评价三种检测方法的疗效考核价值。 结果表明,以重组抗原pGEX-BSjGCP-BSj23和可溶性虫卵抗原SjSEA作为诊断抗原,检测水牛血吸虫病,两者获得的敏感性相当,但前者获得的特异性略高于后者,两者获得的诊断效果均优于重组抗原pGEX-LHD-Sj23;重组抗原pGEX-BSjGCP-BSj23对于低感染强度水牛血清也具有一定的诊断效果;实验兔血清中抗重组抗原pGEX-BSjGCP-BSj23特异性抗体在感染日本血吸虫后出现时间早,药物治疗后消失快,因此重组抗原pGEX-BSjGCP-BSj23具有日本血吸虫病疗效考核价值;而实验兔血清中抗可溶性虫卵抗原SjSEA特异性抗体和抗重组抗原pGEX-LHD-Sj23特异性抗体在感染日本血吸虫后出现时间晚,药物治疗后持续时间长、水平高,因此可溶性虫卵抗原SjSEA和重组抗原pGEX-LHD-Sj23不具有日本血吸虫病疗效考核价值。……   
[关键词]:日本血吸虫病;重组抗原pGEX-BSjGCP-BSj23;ELISA;疗效考核
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:南京农业大学2010年