手机知网 App
24小时专家级知识服务
打 开
手机知网|搜索

枯草杆菌脂肽抗嗜水气单胞菌的机理和应用研究

杨丽莉

  目前水产养殖病害损失比例中鱼类占很大部分,主要以细菌性疾病为主,并且大多数是由嗜水气单胞菌引起的鱼类细菌性出血病。在生产上经常用抗生素类药物作为饲料添加剂,来达到预防和治疗的目的。但是微生物的耐药性问题一直困扰着世界的养殖业,并且抗生素的残留也给人类的健康带来潜在威胁,所以迫切需要寻找一种新的产品来替代抗生素。由于抗菌肽既有广谱抗菌性,不会诱导抗药菌株的产生,不会产生耐药性,所以它有望成为抗生素的替代品。本试验室保存的一株枯草杆菌fmbJ产生的抗菌物质主要为环状脂肽,该脂肽具有良好的热稳定性和部分酶稳定性,抗微生物活性较高,可能成为一种绿色饲料添加剂。本论文主要通过枯草杆菌脂肽对嗜水气单胞菌菌体细胞作用,来探讨其抑菌机理;同时对脂肽产品工艺化条件进行研究;并将脂肽作为饲料添加剂,测定鱼体的生长、免疫和抗氧化性等指标,以此确定脂肽做为饲料添加剂的可行性。主要研究结果如下: 1.研究了脂肽抑制嗜水气单胞菌的敏感性及作用效果。结果表明,嗜水气单胞菌对其具有较高的敏感性,最小抑菌浓度为20μg/mL,最小杀菌浓度为32μg/mL;测定嗜水气单胞菌生长曲线,通过脂肽作用菌体生长不同时期的变化,得到其抑菌和杀菌的效果;通过钾离子试验、碘化丙锭染色、细胞内大分子泄露试验,测定脂肽对嗜水气单胞菌菌体细胞细胞膜的通透性;通过电镜试验观察到脂肽导致嗜水气单胞菌细胞壁缺失、鞭毛散失、胞内物质模糊不清等现象。 2.研究了脂肽对嗜水气单胞菌细胞内基因组DNA和蛋白质的作用。结果表明,脂肽能和嗜水气单胞菌染色体DNA结合,导致DNA最大吸收峰的改变并产生增色效应。同时脂肽能够对嗜水气单胞菌合成的胞外蛋白酶有一定影响,而此种胞外蛋白酶是嗜水气单胞菌的主要毒力因子。 3.研究了脂肽产品制备工艺的条件,通过添加赋形剂,在不同的进风温度,不同的风速,不同的蠕动泵的速度下,根据正交实验优化脂肽的产品回收率。结果表明,在蠕动泵的速度50 ml/h,进风温度210℃,风速70 M3/h,回收率最高,达到75%。 4.研究了在异育银鲫的基础日粮中添加不同量的脂肽产品以后异育银鲫的生长,肠道菌群的变化,免疫以及抗氧化性等的影响。结果表明,添加脂肽以后异育银鲫无论是生长方面,还是肠道菌群的变化,以及免疫和抗氧化能力都优于对照组。添加4%。脂肽时,异育银鲫鱼的增重率在第8周的时候显著提高(p<0.05);肝体显著提高(P<0.05);肠道菌群中有害菌降低;免疫力和抗氧化性能都显著提高(p<0.05)……   
[关键词]:脂肽;嗜水气单胞菌;抑菌机制;免疫;抗氧化
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:南京农业大学2010年