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六种6,7-呋喃香豆素对大鼠肝微粒体CYP2C9和2C19活性的影响

李聚仓

  目的 通过体外孵育反应体系,观察六种6,7-呋喃香豆素类化合物(补骨脂素、异茴芹素、花椒毒酚、花椒毒素、欧前胡素和异欧前胡素)对大鼠肝微粒体CYP2C9、CYP2C19活性的影响,并计算半数抑制浓度IC_(50)。在体外代谢实验结果的基础上,观察给予白芷总香豆素组分(TCD)对经CYP2C9、CYP2C19代谢的药物苯妥英钠、普萘洛尔在大鼠体内药动学参数的影响。 方法 ①采用健康的成年雄性Wistar大鼠,经苯巴比妥诱导肝药酶活性,利用CaCl2沉淀法制备大鼠肝微粒体,并测定大鼠肝微粒体总蛋白含量、CYP总量和细胞色素b5(cytochrome b5,Cytb5)。②500μL体外温孵反应体系中,分别加入六种6,7-呋喃香豆素类化合物或阳性对照药氯霉素,使其终浓度为1.0,2.0,4.0, 8.0,16.0和32.0μmol·mL~(-1),同时设立空白对照组;各管加入CYP2C9或CYP2C19的探针药甲苯磺丁脲(Tolbutamide,TBM)或美芬妥因(Mephenetoin,MPT)后进行孵化反应。用高效液相色谱法分别检测体外反应体系中两种探针药代谢物4-OH-TBM和4-OH-MPT的终浓度。并计算IC_(50),评价六种香豆素对大鼠肝微粒体CYP2C9和2C19活性的抑制程度。③取健康雄性大鼠16只,按体重随机分成两组。试药组(Ⅱ)ig 50.0mg·kg~(-1) TCD,每日1次,连续3日;对照组(Ⅰ)给予等容量生理盐水。末次灌胃1h后,各组ig苯妥英钠50mg·kg~(-1),于给药后1,2,3,4,5,7,9,12,15,20和25h后剪尾取血,高效液相色谱法检测血浆中苯妥英钠的浓度,并计算药动学参数。④取健康雄性大鼠16只,按体重随机分成两组。试药组(Ⅱ)ig 50.0mg·kg~(-1) TCD,每日1次,连续3日;对照组(Ⅰ)ig等容量生理盐水。末次灌胃1h后,各组ig普萘洛尔10 mg·kg~(-1),于ig后0.33,0.66,1,1.5,2,3,4,5,7,9和11h时剪尾取血,高效液相色谱法检测血浆中普萘洛尔的浓度,并计算药动学参数。 结果 ①经苯巴比妥诱导的大鼠肝微粒体蛋白含量为20.08mg·g~(-1)Liver wet, CYP总量和Cytb5含量分别为0.51和0.35nmol·mg~(-1)Protein。其中CYP总量比正常对照组提高了21.38%。②六个浓度的阳性对照药氯霉素均强烈抑制了4-OH-TBM和4-OH-MPT的生成量,且呈剂量依赖性抑制(P<0.01)。六个浓度的香豆素化合物均有不同程度的抑制作用。对CYP2C9的IC_(50)值(μmol·mL~(-1))分别为:补骨脂素(5.26)、欧前胡素(7.15)、花椒毒酚(21.88)异欧前胡素(31.25)、异茴芹素(40.76)、花椒毒素(52.95)和氯霉素(0.33);对CYP2C19的IC_(50)值(μmol·mL~(-1))分别为:补骨脂素(5.40)、欧前胡素(9.82)、花椒毒酚(41.57)异欧前胡素(15.37)、异茴芹素(94.78)、花椒毒素(89.45)和氯霉素(0.55)。③两组苯妥英钠主要药动学参数:对照组(Ⅰ)Ka(0.22h~(-1))、Ke(0.10h~(-1))、t_(1/2α)(2.31h)、t_(1/2β)(7.62h)、AUC(314.63μg·h·mL~(-1))、CL(0.16 L·h~(-1))、Tmax(5.64h)和Vd(0.99 L·kg~(-1));试药组(Ⅱ)Ka(0.27h~(-1))、Ke(0.06h~(-1))、t_(1/2α)(2.31h)、t_(1/2β)(13.46h)、AUC(457.83μg·h·mL~(-1))、CL(0.11L·h~(-1))、Tmax(6.37h)和Vd(1.06 L·kg~(-1))。合用TCD后苯妥英钠的消除速率常数Ke明显减小,清除率CL明显下降,曲线下面积AUC明显增加。④两组普萘洛尔主要药动学参数:对照组(Ⅰ)Ka(1.95h~(-1))、Ke(0.16h~(-1))、t_(1/2α)(0.36h)、t_(1/2β)(4.59h)、AUC(690.70μg·h·mL~(-1))、CL(14.98L·h~(-1))、Tmax(1.41h)和Vd(95.11L·kg~(-1));试药组(Ⅱ)K(a1.94h~(-1))、K(e0.13h~(-1))、t1/2(α0.38h)、t1/2(β5.67h)、AUC(851.08μg·h·mL~(-1))、CL(12.43L·h~(-1))、Tmax(1.41h)和Vd(94.92L·kg~(-1))。合用TCD后苯妥英钠的消除速率常数Ke明显减小,清除率CL明显下降,曲线下面积AUC明显增加。 结论 ①经苯巴比妥诱导后,应用CaCl2沉淀法制备的大鼠肝微粒体CYP含量明显提高,能充分满足体外药物代谢研究的需要。②补骨脂素和欧前胡素对大鼠肝微粒体CYP2C9和CYP2C19的活性呈中等程度的抑制作用。其他香豆素化合物仍有较弱的抑制作用,IC_(50)均小于100μmol·L~(-1)。对CYP2C9抑制作用大致顺序是:补骨脂素≥欧前胡素>花椒毒酚>异欧前胡素>异茴芹素>花椒毒素;对CYP2C19抑制作用大致顺序是:补骨脂素>欧前胡素>异欧前胡素>花椒毒酚>花椒毒素≥异茴芹素。③TCD可明显减慢苯妥英钠在大鼠体内的代谢过程。④TCD可明显减慢普萘洛尔在大鼠体内的代谢过程。……   
[关键词]:6;7-呋喃香豆素类化合物;肝微粒体;CYP2C9;CYP2C19;抑制作用;苯妥英钠;普萘洛尔
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:泰山医学院2011年