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雷公藤提取物的血清药物化学及其对大鼠心脏毒性的实验研究

李慧

  背景雷公藤为我国一味传统中药,已有700多年历史,具有活血化瘀、清热解毒、消肿散结、杀虫止血等功效。现代医学中雷公藤的应用也十分广泛,药理及临床研究证实,雷公藤具有抗炎、抗肿瘤、免疫调节及抗生育等作用,涉及内分泌系统、呼吸系统、皮肤科、眼科、妇科及其他领域。近年来临床上广泛用于治疗类风湿性关节炎、慢性肾炎、子宫肌瘤、器官移植等多种疾病。但其在发挥疗效的同时,对消化、生殖、泌尿、血液系统也都具有一定的毒性作用,大大限制了其应用。这主要由于雷公藤成分复杂,含有多种生物碱、萜类及苷类成分。这些成分中有些既是有效成分,又是有毒成分。因此如何克服雷公藤毒性,研究出更为低毒有效的雷公藤制剂具有广阔的发展前景。研究表明雷公藤对消化、生殖、泌尿、血液系统均有一定毒性作用。但对心脏毒性仅在临床病例有所报道,对于该药临床前心脏毒性的研究较少。 血清药物化学是以传统药物化学为基础综合应用多种现代技术,从血清中分离、鉴定移行成分,研究血清中移行成分与传统疗效的相关性,确定药效物质基础的应用学科。目前国内外相关雷公藤成分的研究报道较多,但这些报道都仅限于在体外对雷公藤药材进行提取、分离,对于雷公藤进入体内后的成分分析未见报道,本研究首次采用血清药物化学研究方法,主要针对进入血液中的雷公藤成分进行分析,结合动物实验结果,从而为初步筛选出其在心脏产生毒性作用的活性成分打下基础。 目的研究雷公藤提取物对大鼠心脏产生的毒性作用,并结合高效液相色谱技术对其进行血清药物化学分析。 方法血清药物化学:首先建立一种能够用于测定雷公藤提取物血清药物化学的HPLC方法,并保证其稳定性、精密度、回收率使实验结果可靠。 大鼠实验前禁食12h,自由饮水,灌胃给予10mg·mL~(-1)雷公藤提取物1mL·100g~(-1)。分别于给药前及给药后0.5,1,2,4,8,12,16,24h经股动脉插管取血。制备血清。进行HPLC检测。心脏毒性的检测: 进行预实验,确定给药剂量。将大鼠分为四组,包括:雷公藤提取物低剂量组、雷公藤提取物中剂量组、雷公藤提取物高剂量组及空白对照组。空白对照组灌胃给予生理盐水,雷公藤提取物各剂量组灌胃给予不同浓度雷公藤提取物溶液。急毒实验前给药一次,长毒每日给药一次,连续90d。 各组大鼠称重,测定给药前及给药后各时间点血钾水平,心电图、心功能个指标的变化。大鼠解剖后观察心脏形态,HE染色观察心脏组织病理学变化。 实验数据利用Excel整理,采用SPSS15.0统计软件分析数据。数据均用x±s表示,各组间血钾和心电图比较采用配对t检验,各组间心功能检测指标比较采用双侧t检验。 结果血清药物化学:雷公藤提取物在所建立的检测方法下能够很好的分离,雷公藤提取物给药后24h内血中先后出现了8个移行成分,其中5个为雷公藤提取物所含成分的原形, 2个为新产生的代谢产物,1个为血清固有成分。雷公藤内酯醇为8个移行成分之一。各成分入血时间不同,但都呈现先升高后下降的浓度趋势。 急性毒性实验:与给药前及空白对照组比较,低剂量组在给药后4-8h,血钾明显降低(P<0.05)。中剂量组在给药后2-24h血钾都明显降低(P<0.05),。高剂量组给药后2-4h血钾均降低(P<0.05),8-24h血钾显著降低(P<0.01)。 与给药前及空白对照组相比,低剂量组的Q-T间期、QRS间期、S-T间期、ST偏移量以及心率在给药后4-12h有变化,(P<0.05)。中剂量组以上各指标在给药后2-24h有明显变化(P<0.05或P<0.01)。高剂量组在给药后各指标在1h就开始出现变化,至24h都有显著差异(P<0.05或P<0.01)。 与空白组相比,低剂量组的LVSP在给药后2-8h,中、高剂量组在2-12h明显降低(P<0.05或0.01);各剂量组的LVEDP在给药后2-12h均明显升高;而低剂量组的+dP/dtmax从4-24h,中、高剂量组从2-12h均显著下降(P<0.05或0.01);低剂量组的-dp/dtmax从4-12h,中、高剂量组从2-12h也均显著下降(P<0.05或0.01) 正常组及低剂量组大鼠心肌纤维排列良好,心肌细胞膜完整,细胞核核膜及染色质清晰,中剂量组心肌细胞部分有断裂,高剂量组心肌细胞可见炎症细胞浸润。 长期毒性实验结果:与给药前及空白对照组相比,低剂量组大鼠给药后各时间点血钾水平无改变(P>0.05),中剂量组在给药后90d血钾降低(P<0.05);高剂量组大鼠在给药后30-90d,血钾均显著降低(P<0.01)。 与给药前及空白正常对照组相比,低剂量组除S-T间期在给药60d后明显延长(P<0.05)外,其它各心电图指标如Q-T间期、S-T间期、QRS间期、心率和ST偏移量均无变化(P>0.05);中剂量组在给药60d后出现Q-T间期、S-T间期、QRS间期延长(P<0.05),在给药后90d出现心率降低,ST段下降(P<0.05);高剂量组在给药15d后出现S-T间期、QRS间期延长(P<0.05),给药30d后出现Q-T间期延长、心率降低和ST段下降(P<0.05)。 与空白对照组比较,低剂量组给药后各时间点LVSP无改变(P>0.05),中、高剂量组分别在给药后60和15d出现降低(P<0.05);低剂量组给药后;LVEDP无改变,中、高剂量组分别在给药后90和30d出现升高(P<0.05);低剂量组给药后±dp/dtmax无改变(P>0.05),中、高剂量组分别在给药后60d和30d出现下降(P<0.05) 由HE染色观察大鼠心肌组织可见:急毒的空白对照组及雷公藤提取物低剂量组大鼠心肌纤维排列良好,心肌细胞膜完整,细胞核核膜及染色质清晰,雷公藤提取物中剂量组心肌细胞部分有断裂,雷公藤提取物高剂量组心肌细胞轻微可见炎症细胞浸润。 长毒的空白对照组大鼠心肌纤维排列良好,心肌细胞膜完整,细胞核核膜及染色质清晰。雷公藤提取物低剂量组大鼠心肌纤维排列良好,心肌细胞膜完整。雷公藤提取物中剂量组大鼠心肌纤维模糊、断裂,细胞核萎缩。雷公藤提取物高剂量组大鼠心肌细胞破裂、空泡变性,胞浆模糊不清,细胞核死亡。 结论雷公藤提取物的血清药物化学可初步明确其血清内移行成分是代谢生成或是药物的原型成分;雷公藤提取物对大鼠心脏有急性毒性,可降低血清内钾的含量,改变大鼠心电图及心功能,对心肌组织的影响不明显;雷公藤提取物长期用药对大鼠心脏有毒性作用,用药后血钾明显降低,心电图及心功能都有变化,对心肌组织有明显毒性作用。……   
[关键词]:雷公藤提取物;血清药物化学;血钾;心电图;心功能
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:河北联合大学2011年