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N-半胱氨酸化壳聚糖的合成、表征及转基因的初步研究

赵卯琦

  本论文研究了通过巯基化修饰合成的半胱氨酸化壳聚糖与质粒DNA的结合及在谷胱甘肽(GSH)的作用下对质粒DNA的释放情况。 基因治疗已成为近二十年来生物医学研究领域的一个热点。由基因治疗而引发的热点问题是基因载体的选择和构建。基因载体一般分为两大类:病毒型基因载体和非病毒型基因载体。病毒型载体效率较高,但存在导向性差、携带能力低、免疫原性和潜在致瘤性等安全性隐患。因此,非病毒性基因载体受到越来越多的关注。其中,壳聚糖因其良好的生物相容性、阳离子性和生物可降解性而备受关注。 判断一种基因载体的优劣取决于结合pDNA的能力和进入细胞后释放pDNA的能力。然而壳聚糖作为基因载体存在两个缺点:一是壳聚糖水溶性差,二是进入溶酶体后壳聚糖释放pDNA效率较低。由于细胞内外GSH的浓度差异很大,细胞内浓度~10 mM,但细胞外浓度<10μM,GSH对于壳聚糖-pDNA纳米粒的结合及分离有一定的作用。故本实验采用化学接枝法合成了三种不同取代度的半胱氨酸化壳聚糖,并采用分子量测定,FT-IR,XRD和元素分析对其进行表征。结果显示,N-半胱氨酸化壳聚糖成功合成,并且结晶性能下降,因此水溶性增强。经GSH处理和电泳分析表明半胱氨酸化壳聚糖结合质粒DNA的能力和壳聚糖类似,在GSH的作用下,半胱氨酸化壳聚糖释放质粒DNA的能力优于壳聚糖。……   
[关键词]:壳聚糖;半胱氨酸;基因载体;谷胱甘肽;质粒DNA
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:华中科技大学2011年