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传统发酵牦牛奶中益生乳杆菌筛选及其免疫调节功能研究

张丽

  为了满足市场对营养保健需求的不断增加,获得具有益生保健功能产品,对益生菌的研究日益深入广泛,对益生菌类相关产品的开发越来越重要。乳酸菌发酵乳制品是具有益生性能乳杆菌菌株的潜在来源,本研究从甘肃牧区12个不同采样点采集发酵牦牛奶样品,以期分离获得具有优良益生和免疫调节功能的乳杆菌分离株。试验通过表型和快速鉴定分析甘肃牧区乳杆菌分离株物种多样性,并在此基础上采用体外筛选方法,分别从工业特性、益生特性和安全特性3方面进行具有优良益生性能乳杆菌分离株筛选,并对筛选获得的优良乳杆菌分离株进行免疫调节功能体内研究,评价其免提调节功能,丰富益生乳杆菌资源。主要研究结果如下: 1)通过采用菌落形态、菌体特征、生理生化检验和API快速鉴定技术,对甘肃牧区传统自制发酵牦牛奶中分离获得的71株乳杆菌分离株进行属种鉴定。结果表明,其中Lactobacillus. plantarum,23株,Lactobacillus. acidophilus,21株,Lactobacillus. casei,12株,Lactobacillus. fermentum,7株,Lactobacillus. brevis,3株,Lactobacillus. minor,3株和Lactobacillus. curvatus,2株。 2)采用益生菌体外筛选方法,从工业特性、益生特性和安全性能全面考察乳杆菌分离株益生性能,优选出遗传性状稳定,产酸、凝乳性能优良,耐酸、耐胆盐,能顺利通过模拟人体胃肠道,有效黏附小肠上层细胞,产生抑菌物质,以便发挥其益生功能,同时对30种抗生素中27种均表现敏感,安全性能高的乳杆菌分离株G12和E2。 3)采用16S rDNA分子鉴定技术,对优选的乳杆菌分离株G12和E2进行分子水平鉴定,通过同源性分析可知,G12与Lactobacillus. casei同源性最高,E2与Lactobacillus. acidophilus的同源性最高。Lactobacillus. casei G12和Lactobacillus. acidophilus E2的16S rDNA序列已收录于GenBank数据库,登录号分别为HM 598683和HM 598684。 4)采用BALB/c小鼠活体试验方法,研究发现Lactobacillus. casei G12和Lactobacillus. acidophilus E2菌液饲喂30天,G12和E2不同剂量对小鼠免疫器官,即胸腺、脾脏指数均没有显著影响(P>0.05)。 5)通过BALB/c小鼠体内试验结果表明,Lactobacillus. casei G12和Lactobacillus. acidophilus E2高、中剂量组可显著提高小鼠派伊尔结巨噬细胞吞噬能力(P<0.05),说明Lactobacillus. casei G12和Lactobacillus. acidophilus E2具有促进固有免疫调节功能作用。 6)通过BALB/c小鼠体内试验结果表明,Lactobacillus. casei G12和Lactobacillus. acidophilus E2可显著提高细胞因子IL-10、IL-12和IFN-γ分泌(P<0.05),其中Lactobacillus. casei G12高剂量组可以极显著提高细胞免疫因子的分泌(P<0.01),说明Lactobacillus. casei G12和Lactobacillus. acidophilus E2具有促进细胞免疫调节功能作用。 7)给BALB/c小鼠喂服不同剂量Lactobacillus. casei G12和Lactobacillus. acido-philus E2菌液后,Lactobacillus. casei G12高、中和低剂量组与Lactobacillus. acidophilus E2高、中剂量组均可显著刺激浆细胞分泌slgA(P<0.05,P<0.01),其中Lactobacillus. casei G12高剂量组较Lactobacillus. acidophilus E2高剂量组效果显著(P<0.05),sIgA分泌量与乳杆菌株黏附能力呈正相关。此外,Lactobacillus. casei G12和Lactobacillus. acidophilus E2菌液可有效提高小鼠血清半数溶血值,促进IgM分泌。说明Lactobacillus. casei G12和Lactobacillus. acidophilus E2具有体液免疫调节功能。……   
[关键词]:发酵牦牛奶;筛选;益生性能;乳杆菌;16S rDNA;小鼠;免疫调节
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:甘肃农业大学2011年