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二甲氧苄啶对Wistar大鼠的毒理学研究

苏士佳

  甲氧苄啶类化合物是一类具有抗菌增效作用的药物,二甲氧苄啶(Diaveridine,DVD)是其中具有代表性的一种药物。由于二甲氧苄啶上市的年代比较久远,缺少毒理学和药理学的相关资料,并且评价体系与现在不同,所以为了评价二甲氧苄啶的安全性,需要对其进行系统的毒理学试验,包括二甲氧苄啶的急性毒性、亚慢性毒性、繁殖和喂养致畸试验。并以此为基础计算每日容许摄入量(ADI)和安全浓度(SC),为二甲氧苄啶的临床使用提供基本的毒理学评价依据。 1急性毒性试验 选用SPF级Wistar大鼠雌雄各16只,采用Up-and-Down (UDP)法进行试验。二甲氧苄啶用0.25%的羧甲基纤维素钠(CMC)助溶制成混悬液,一次性灌胃染毒,观察14天内的中毒反应,根据统计分析软件AOT 425 Stat Pgm计算半数致死量和95%的可信限。试验得出雌性Wistar大鼠的LD5o为2330mg/kg b.w.,95%可信限为1798到4540mg/kg b.w.;雄性Wistar大鼠的LD5o为3100 mg/kg b.w.,95%可信限为2311到4080 mg/kg b.w.。按照急性毒性分级标准确定二甲氧苄啶为低毒性物质。 290天喂养试验 选用SPF级(?)Vistar大鼠170只,按体重随机分为5组饲喂13周。空白对照组饲喂不添加药物的空白饲料;其余4组剂量分别为二甲氧苄啶(DVD)23、230、1150、2000 mg/kg饲料。空白对照组和二甲氧苄啶2000 mg/kg饲料组每组雌雄各20只Wistar大鼠;二甲氧苄啶23、230、1150 mg/kg饲料组每组雌雄各15只Wistar大鼠,雌雄分笼饲养,饲养条件严格按照国际动物福利规定。各周称量大鼠体重及摄食量,计算饲料利用率。在试验中期各组宰杀雌雄大鼠各5只,试验末期各组宰杀雌雄大鼠各10只。空白对照组和二甲氧苄啶2000 mg/kg饲料组余下的雌雄大鼠饲喂基础饲料2周后安乐处死。取全血及血清进行血液学指标检验,尸体剖检和病理组织学检查。对主要脏器绝对重量和相对重量进行统计学比较分析。大鼠在整个试验期内,二甲氧苄啶23 mg/kg饲料组体重增长、饲料消耗量、饲料利用率、血常规指标、血液生化指标、器官相对重量和病理检查与空白相比均无显著差异(p>0.05)。二甲氧苄啶1150和2000 mg/kg饲料组生化指标与空白组相比ALP和K+出现具有病理学意义的升高。组织病理学检查发现肝脏仅中央静脉部分出现炎性淋巴细胞浸润,肾脏皮质和髓质部分均出现异常病变,肾上腺皮质部分出现水泡样病变。二甲氧苄啶230mg/kg饲料组从喂养实验的第3周开始大鼠的平均体重极显著低于空白对照组(p<0.01);二甲氧苄啶1150 mg/kg和2000 mg/kg饲料组的大鼠从喂养实验的第1周开始平均体重极显著低于空白对照组(p<0.01),这个趋势一直保持到试验结束。二甲氧苄啶1150和2000 mg/kg饲料组雌性大鼠肝脏、肾脏和大脑相对重量显著大于空白对照组;雄性大鼠的肾、睾丸(带附睾)和大脑的相对重量显著大于空白对照组,血常规和其它生化指标均没有异常变化。组织病理学观察表明,二甲氧苄啶对Wistar大鼠亚慢性毒性作用的靶器官为肾脏。二甲氧苄啶亚慢性最大未观察到有害作用剂量(NOAEL)为23 mg/kg饲料。 3二代繁殖试验 选用健康非经产SPF级Wistar大鼠215只,按体重随机分为5组,在试验开始(F0代)时雌鼠每组各25只,雄性每组各18只(以保证每组20只受孕雌鼠);在继续试验(Fl代)中雌鼠每组各30只,雄性20只。设空白对照组和二甲氧苄啶试验组,剂量为二甲氧苄啶23、230、1150、2000 mg/kg饲料。各剂量组饲喂13周后进行交配。试验期间统计分析母代及子代大鼠的体重、摄食量、繁殖指数等指标,对大鼠生殖系统进行组织病理学检查。二甲氧苄啶1150、2000 mg/kg饲料组F0代和F1代胎鼠体重和饲料利用率显著性低于空白对照组;孕鼠增重、窝平均活仔数和第0、4、7、14、21天平均仔重极显著低于空白对照组(p<0.01)。雄鼠生殖器官病理学各剂量组检查均正常,但是最高剂量组部分F1代雌鼠子宫壁出现萎缩、子宫腔缩小以及出现子宫肿瘤。二甲氧苄啶对大鼠生殖发育毒性的NOAEL为23 mg/kg饲料。 4喂养致畸试验 喂养致畸试验与二代繁殖试验F1代联合进行,将大鼠按随机分为5组,每组各30只雌鼠,20只雄鼠。设空白对照组和二甲氧苄啶试验组,剂量为二甲氧苄啶23、230、1150、2000 mg/kg饲料。各组均以设定剂量连续饲喂13周后交配,在妊娠第20天时进行剖腹检查畸胎。试验结果显示二甲氧苄啶1150和2000 mg/kg饲料组孕鼠增重、窝平均活仔数和第0、4、7、14、21天平均仔重极显著低于空白对照组p<0.01)。各组均未出现明显的与药物相关的外观和内脏畸形。二甲氧苄啶致畸试验NOAEL为23 mg/kg饲料。 5计算每日容许摄入量(ADI)及安全浓度(SC) 根据上述试验结果综合比较确定DVD的NOAEL为23 mg/kg饲料,按照FDA给出的ADI (acceptable daily intake)和SC (safe concentration)计算公式,计算得出二甲氧苄啶的每日容许摄入量(ADI)为0.0023 mg/kg b.w.,在肌肉、肝脏、肾脏、脂肪中的安全浓度(SC)分别为0.46、1.38、2.76、2.76 mg/kg。 所有试验条件、设计与步骤均符合美国食品药品管理局(FDA)颁布的毒理学安全性评价原则、经济合作与发展组织(OECD)毒理学实验指导标准和兽药注册国际协调局(VICH)的新兽药安全性评价标准。对DVD的急性毒性、亚慢性毒性、繁殖致畸毒性进行了系统的毒理学评价。通过本研究可为二甲氧苄啶的临床使用提供相关的科学资料。……   
[关键词]:二甲氧苄啶;急性毒性;亚慢性毒性;繁殖和致畸毒性;最大未观察到有害作用剂量
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:华中农业大学2011年