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苹果SDH1基因和猕猴桃IDH基因的异源转导

邹珺

  抗坏血酸(L-ascorbic acid,AsA),又叫维生素C,对人类的健康起着重要作用。同时,它在植物的生理生化反应中也起着至关重要的作用,尤其是在植物处于逆境胁迫时。有研究表明,艾杜糖脱氢酶基因(IDH,Isocitrate dehydrogenase)是参与抗坏血酸降解途径的一个关键酶。根据前人的研究以及我们实验室的分析发现,山梨醇脱氢酶基因(Sorbitol dehydrogenase, SDH)可能有着与IDH基因相似的功能,也可能参与AsA的降解,高的SDH活性可能与苹果等蔷薇科果树低AsA含量有关。为进一步验证这一推论,本试验以美味猕猴桃品种‘秦美’为材料,克隆了IDH基因,并构建了这一基因的植物表达载体,同时构建了苹果SDH1基因的植物表达载体,为进一步研究二者的相关性以及二者与AsA的关系奠定了基础。本试验的主要研究结果如下: (1)克隆了美味猕猴桃‘秦美’中的IDH基因,并得到这一基因的cDNA全长,该序列长1239bp,含有一个1080bp的开放阅读框,编码359个氨基酸,经Blast比对发现苹果的SDH1基因与猕猴桃的IDH基因在氨基酸序列上有着较高的相似性,这为我们的前期推论(SDH可能有着与IDH相似的功能,也可能参与AsA的降解,高的SDH活性可能与苹果等蔷薇科果树低AsA含量有关)提供了有力的支持; (2)构建了猕猴桃IDH基因的过量植物表达载体pWR-IDH,并成功地转化根癌农杆菌EHA105感受态细胞; (3)构建了苹果SDH1基因的过量植物表达载体pWR-SDH1,并成功地转化根癌农杆菌EHA105感受态细胞; (4)用农杆菌介导法将苹果的SDH1基因转化番茄,并获得PCR检测阳性的转基因植株; (5)用农杆菌介导法将猕猴桃的IDH基因转化番茄,并获得PCR检测阳性的转基因植株; (6)用农杆菌介导法将猕猴桃的IDH基因转化苹果,并获得PCR检测阳性的转基因植株;……   
[关键词]:SDH1基因;IDH基因;基因克隆;遗传转化
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:西北农林科技大学2011年